抑制细胞增殖的取代双吲哚基马来酰亚胺制造技术

＊＊＊ （Ⅰ） 式（Ⅰ）（其中，Ｒ↑［１］是氢且Ｒ↑［２］是甲基，或者Ｒ↑［１］是甲基且Ｒ↑［２］是氢，或者Ｒ↑［１］是羟甲基且Ｒ↑［２］是甲基）的取代吡咯及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐是适用于治疗癌的抗增殖剂。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
抑制细胞增殖的取代双吲哚基马来酰亚胺本专利技术涉及下式的取代吡咯其中，R1是氢且R2是甲基，或者      R1是甲基且R2是氢，或者      R1是羟甲基且R2是甲基还涉及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。式Ⅰ的化合物具有抗增殖活性，具体地说，它们抑制细胞周期的G2／M期中的细胞分裂，所以，通常被称为“G2／M期细胞周期”抑制剂。式Ⅰ的化合物被U．S．P．5，057，614的式Ⅰ覆盖(但未作为一类或单独地具体公开)。此外，U．S．P．5，057，614中未公开或表明本专利技术化合物的上述活性，所以，本专利技术化合物的上述活性令人感到意外。上式Ⅰ包括如下三种化合物：-->术语“药物上可接受的前体药物”表示这样的化合物：在生理条件下或通过溶剂解可将它转化为式Ⅰ的任意化合物或转化为所述化合物的药物上可接受的盐。式Ⅰ的化合物以及所述化合物的药物上可接受的盐是通过下列示意图所表示的反应制备的。这些化合物中每一种的合成还被描述于实施例1～3中。化合物Ⅰ-1可这样制备：将(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(3)与[1-(2，2-二甲基-丙酰)-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(7)反应，再用碱处理反应产物。化合物Ⅰ-2可这样制备：将(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(17)与[1-(2，2-二甲基-丙酰)-6-硝基-1H-吲哚-3-基]-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(19)反应，再用碱处理反应产物。化合物Ⅰ-3可这样制备：将(1-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酰氯(10)与(1-甲基-6-硝基-1H-吲哚-3-基)-3-乙亚氨基酸1-甲基乙酯盐酸化物(15)反应，再用酸处理反应产物。-->-->-->-->下面阐述本专利技术化合物的抗增殖活性。这些效果启示：所述化合物适用于治疗癌(尤其实体瘤)。雌激素受体阴性上皮乳腺癌系(MDA-MB-435)购自美国典型细胞培养物保藏中心(ATCC；Rockville，MD)并在ATCC推荐的培养基中生长。要分析试验化合物对这些细胞生长的影响，将细胞以每孔2000个细胞铺板于96孔组织培养板(“试验板”)，并在37℃和5％CO2存在下保温一夜。次日，将试验化合物溶于100％二甲亚砜(DMSO)而得10mM储备溶液。用无菌蒸馏水稀释每种化合物至1mM，然后加到96孔“主平板”的三份孔中(孔内盛有形成40μM的最终浓度的足量培养基)。用培养基逐个稀释所述“主平板”中的化合物。将四分之一终体积的已稀释化合物转到两份“试验板”上。将DMSO加到一排“对比细胞”中，使每孔的最终DMSO浓度为0．1％。将“试验板”放回培养箱，在添加试验化合物3天后按下述方法分析一块“试验板”。类似地，在添加试验化合物5天后，按下述方法分板第二块“试验板”。将3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-溴化四唑鎓(噻唑基蓝(thiazolyl blue)；MTT)加到每孔中至1mg／ml的最终浓度。再在37℃下将平板保温3小时。然后，除去含MTT的培养基，往每孔添加50μl 100％乙醇而溶解生成的甲_代谢物。为保证完全溶解，在室温下将平板振荡15分钟。在微量滴定板读数器(MolecularDynamics)中读取570nm波长处的吸光度(以650nm为参比)。通过从所有的孔扣除空白，再从1．00减去每次试验三份的平均吸光度除以对比物的平均值所得的商而计算抑制百分数。从浓度的对数与抑制百分数的曲线图的线性回归确定抑制浓度(IC50和IC90)。结肠腺癌系SW480和结肠癌系HCT-116也得自ATCC并按前面提供的同样方案(作如下修改)试验。将细胞系SW480以每孔1000个细胞铺板并在添加试验化合物6天后分析。将细胞系HCT-116以每孔750个细胞铺板并在添加试验化合物4天后分析。至于MTT分析，在吸出含MTT的培养基之前，将平板在1000rpm下离心5分钟，应用100μl100％乙醇溶解甲_。将前面体外试验的结果列于表Ⅰ～Ⅲ中。-->表Ⅰ在细胞系MDA-MB-435中的抗增殖活性化合物IC50(μM)化合物Ⅰ-10.03*化合物Ⅰ-30.05*化合物Ⅰ-20.06**至少三个独立试验的平均值表Ⅱ在细胞系HCT-116中的抗增殖活性化合物IC50(μM)化合物Ⅰ-10.17*化合物Ⅰ-30.23*化合物Ⅰ-21.66**至少三个独立试验的平均值表Ⅲ在细胞系SW480中的抗增殖活性化合物IC50(μM)化全物Ⅰ-10.20*化全物Ⅰ-30.22*化全物Ⅰ-21.86**至少三个独立试验的平均值要分析所述化合物对细胞周期进展的影响，将MDA-MB-435细胞(ATCC；Rockville，MD)以每10cm皿1×106个细胞／10ml铺板于如下生长培养基中：RPMI1640+10％热灭活的胎牛血清，2mM L-谷氨酰胺和5U／ml pen-strep(都得自GIBCO／BRL，Gaithersburg，MD)。在37℃和5％CO2存在下将细胞保温一夜。次日，将10μl每种待测化合-->物于100％DMSO中的溶液加到各个皿中而得1／1000x最终浓度的储备溶液。此外，将10μl 100％DMSO加到对比皿中。包括对比板在内的所有平板中DMSO的最终浓度是0．1％。将这些平板放回培养箱中。然后，在各时间段，将每块平板中的培养基转移到50ml离心管中。再用5ml磷酸盐缓冲盐水(PBS；GIBCO／BRL)洗涤残留在皿中的细胞层。移出PBS并与相应管中的培养基合并。在37℃下将细胞用胰蛋白酶消化5分钟，收集溶液并与相应管中的培养基和PBS合并。然后，在1200rpm下将这些管离心5分钟。这样固定细胞：移出上清液，轻敲离心管使粒状沉淀物分散开，再在缓缓旋转的同时添加5ml冷的70％乙醇。然后，在-20℃下将细胞贮存24小时以上。从冷冻机中取出所述盛有细胞的管，在室温下放置20～30分钟。在3000rpm下将这些管离心5分钟。移出上清液，用5ml PBS洗涤粒状沉淀物，象上述那样将管离心。接着，移出上清液，将粒状沉淀物重悬浮于0．5ml PBS中。此后，往每支管中添加0．5ml RNA酶A(RNAseA)(1mg／ml于PBS中)，将这些管在37℃下保温15分钟。往每支管中添加100μl碘化丙锭(Sigma，St．Louis，MO)(1mg／ml于PBS中)，再在室温下将管保温2～3分钟。将每份形成的溶液滤过滤器帽管(filtercap tube)(Becton Dickinson，San Jose，CA，#2235)。在FACSort仪(Becton-Dickinson)中应用厂商的CellQUEST程序读取样品，并利用厂商的ModFIT软件分析。该检测提供了下列每个期内细胞的百分数指示：G0／G1期、DNA合成(S)期和G2／M期。在添加试验化合物Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3一天后分析细胞周期进展实验的结果并总结于下表Ⅳ中。-->表Ⅳ试验化合物对细胞周期的影响化合物浓度    每个细胞周期期中的细胞％    G1    S    G2/M    DMSO 0.1％ 43.93％ 41.08％ 14.99％化合物Ⅰ 本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的化合物 ＊＊＊ Ⅰ 其中，Ｒ↑［１］是氢且Ｒ↑［２］是甲基，或者 Ｒ↑［１］是甲基且Ｒ↑［２］是氢，或者 Ｒ↑［１］是羟甲基且Ｒ↑［２］是甲基 及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。

【技术特征摘要】
US 1998-3-17 60/078,3311．下式的化合物其中，R1是氢且R2是甲基，或者      R1是甲基且R2是氢，或者      R1是羟甲基且R2是甲基及其药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。2．下式的权利要求1的化合物和所述化合物的药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。3．下式的化合物和所述化合物的药物上可接受的前体药物或药物上可接受的盐。4．下式的化合物和...

【专利技术属性】
技术研发人员：UH德格拉，DM胡瑞恩，J柯，GF威伯，
申请(专利权)人：弗哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]