猪环状病毒和细小病毒疫苗制造技术

本发明专利技术涉及抵抗猪多系统萎缩综合症（ＰＭＷＳ）的抗原制品和疫苗，其包括至少一种猪环状病毒，优选Ⅱ型猪环状病毒，和至少一种猪细小病毒。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及抵抗PMWS综合症(猪多系统萎缩综合症也称断奶后多系统萎缩综合症)的疫苗。下文中引用了许多文献，而且下文引用的各种文献中又参考或引用了许多文献。本文不承认任何这些文献对于本专利技术来说是真正的先有技术。所有本文引用的文献和本文引用文献中参考或引用的文献均以参考文献并入本文。PCV(即“猪环状病毒”)最初是作为猪肾细胞系PK/15中非致细胞病变的污染物而被检测到的。该病毒和鸡贫血病毒(CAV)以及PBFDV病毒(Pscittacine Beak and Feather Disease Virus)一起分类为环状病毒科(Circoviridae)。它是一个无包被小病毒(15-24nm)，其共同特点是含有一个1.76-2.31kb环状单链DNA形式的基因组。最初认为该基因组编码一个约30kDa的多肽(Todd等，Arch Virol 1991,117；129-135)。然而最近的工作显示更为复杂的转录(Meehan B.M.等，1997,78；221-227)。而且，已知这3类环状病毒之间在核苷酸序列或共同抗原决定族上没有显著的同源性。来自PK/15细胞的PCV被认为是不致病的。其序列见B.M.Meehan等，普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.)1997(78)221-227。只是最近一些作者才认为PCV株可能是致病性的，并与PMWS综合症有关(Gupi P.S.Nayar等，Can.Vet.J，第38卷，1997:385-387和Clark E.G.,Proc.Am.Assoc.Swine Prac.1997:499-501)。Nayar等使用PCR技术在患有PMWS综合症的猪中检测到PCV DNA。在加拿大、美国和法国检测到的PMWS的临床特征是体重逐渐减轻和呼吸急促、呼吸困难和黄疸等表现。从病理学角度看，其表现是淋巴细胞或肉芽肿浸润、淋巴结病，更为罕见的是肝炎、淋巴细胞或肉芽肿肾炎(Clark E.G.,Proc.Am.Assoc.Swine Prac.1997；499-501；LaSemaine Vététinaire No.26,supplement to La Semaine Vététinaire1996(834)；兽医周刊(La Semaine Vétérinaire)1997(857)；Gupi P.S.Nayar等，Can.Vet.J，第38卷，1997；385-387)。本申请人已成功地从加拿大、美国(加利福尼亚)和法国(布列塔尼)的农场来源的肺或神经节样品中分离了5个新的PCV株。在患有PMWS综合症的猪损伤处检测到这些病毒，但在健康猪中没有。此外，本申请人还测定了这些株系中的4个即加拿大、美国和两个法国株系的基因组序列。这些株系相互之间在核苷酸水平上显示了非常强的超过97％的同源性，而与PK/15株的同源性则低得多，约76％。因此，这些新的株系可以认为是代表了猪环状病毒的一种新类型即Ⅱ型，PK/15代表Ⅰ型。这5个新株系根据布达佩斯条约分别于1997年10月2日星期4和1998年1月16日星期5保藏于ECACC(欧洲细胞培养物保藏所(EuropeanCollection of Cell Cultures)，应用微生物和研究中心(Centre forApplied Microbiology & Research),Porton Down,Salisbury,Wiltshire SP4 OJG，英国)，其中1997年10月2日星期4-保藏号V97100219(本文称为Imp.1008PCV)-保藏号V97100218(本文称为Imp.1010PCV)-保藏号V97100217(本文称为Imp.999PCV)，1998年1月16日星期5-保藏号V98011608(本文称为Imp.1011-48285)-保藏号V98011609(本文称为Imp.1011-48121)。本申请人在一项实验室重现猪多系统萎缩综合症的实验中发现，猪环状病毒联合猪细小病毒可导致该疾病的加重。因此，本专利技术的主题是给猪接种猪环状病毒(具体地是Ⅰ型或Ⅱ型，优选Ⅱ型)的疫苗，并联合接种猪细小病毒疫苗。这理解为给猪接种二价疫苗或同时使用猪环状病毒疫苗和猪细小病毒疫苗。参考细小病毒株是NADL-2株，它可依据保藏号VR-742从ATCC保藏中心获得。预防株细小病毒的疫苗接种是本领域技术人员熟知的，而且预防猪细小病毒的疫苗可从商业途径购得。可提到的例子是Parvovax_(预防猪细小病毒的灭活疫苗，MERIAL销售)。也见例如P.Vannier和A.Laval.,Point.Vét.1993,25(151)，53-60；G.Florent等，猪兽医协会第9届会议论文集(Proceedings of the Ninth Congress of PigVeterinary Society)，1986年7月15-18日，西班牙巴塞罗那。对于DNA疫苗，可参见例如WO-A-98 03658。因此，本专利技术的主题是抵抗PMWS综合症的抗原制品，包括至少一种猪环状病毒抗原(优选Ⅱ型环状病毒)和至少一种猪细小病毒抗原。根据本专利技术，猪环状病毒抗原(优选Ⅱ型环状病毒)和猪细小病毒抗原各自独立地包含选自减毒活全抗原、灭活的全抗原、亚基抗原、重组活载体和DNA载体的抗原。应该理解，根据本专利技术的组合可涉及任何适当抗原或抗原制品形式，应当理解，对于给定组合，不一定使用相同形式。此外，正如人们所已知的，抗原制品可包含兽医学上可接受的载体或赋形剂，并可选择包含兽医学上可接受的佐剂。本专利技术的主题还涉及抵抗PMWS综合症的免疫原性组合物或疫苗，其包含处于兽医学上可接受的载体或赋形剂之中的有效剂量的上述环状病毒+细小病毒抗原制品，并可选择包含兽医学上可接受的佐剂。免疫原性组合物引起免疫应答，其可以但不必需具有有保护性。疫苗组合物引起保护性应答。因此，术语“免疫原性组合物”包括“疫苗组合物”(因为前一术语可以是保护性的组合物)。本专利技术主题还涉及包含包装上分开的抵抗猪环状病毒的抗原制品或免疫原性组合物或疫苗和抵抗猪细小病毒的抗原制品或免疫原性组合物或疫苗的免疫或疫苗接种试剂盒。该试剂盒可具有上述定义抗原制品、免疫原性组合物和疫苗的各种特征。本专利技术主题还有抵抗PMWS综合症的免疫或疫苗接种方法，包括施用抵抗猪环状病毒的免疫原性组合物或疫苗和抵抗猪细小病毒的免疫原性组合物或疫苗，或施用在同一制剂中包含一种对两种病毒均特异的抗原制品的二价免疫原性组合物或疫苗。具体地，该免疫或接种方法使用上述疫苗。本专利技术的主题还在于抵抗特别是以上定义的抵抗细小病毒的抗原制品或免疫原性组合物或疫苗，联合抵抗猪环状病毒的抗原制品或免疫原性组合物或疫苗，在制备用于抵抗PMWS综合症的药物组合物中的应用。为了产生环状病毒抗原制品，环状病毒可在细胞特别是细胞系如PK/15细胞中传代后获得。培养物上清液或提取物，选择性地用标准技术纯化，可用作抗原制品。对于减毒抗原制品和减毒免疫原性组合物或疫苗，减毒可根据常规方法来进行，例如在细胞上传代，优选在猪细胞特别是细胞系如PK/15细胞上传代(例如50-150代，特别是约100代)。通常，这些免疫原性组合物和疫苗包含从本文档来自技高网...

【技术保护点】
抵抗ＰＭＷＳ综合症的抗原制品，其含有猪环状病毒抗原和猪细小病毒抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】FR 1998-7-6 98/087771．抵抗PMWS综合症的抗原制品，其含有猪环状病毒抗原和猪细小病毒抗原。2．根据权利要求1的制品，其含有Ⅱ型猪环状病毒抗原。3．根据权利要求2的制品，其中Ⅱ型猪环状病毒抗原是选自保藏于ECACC、具有如下保藏号的制备物的环状病毒抗原-保藏号V97100219-保藏号V97100218-保藏号V971002l7-保藏号V980l1608-保藏号V980l1609。4．根据权利要求1-3之任一项的制品，其中猪环状病毒和猪细小病毒抗原相互独立地包含选自减毒活全抗原、灭活全抗原、亚基抗原、重组活载体和DNA载体的抗原。5．根据权利要求1-4之任一项的制品，其还包含与另一种猪病原体相应的其它效价。6．根据权利要求5的制品，其包含的其它效价选自PRRS、猪肺炎枝原体、大叶性肺炎放线杆菌、大肠杆菌、萎缩性鼻炎、假狂犬病、猪霍乱、猪流感病毒和它们的组合。7．根据权利要求5的制品，其含有的其它效价是PRRS。8．抵抗PMWS综合症...

【专利技术属性】
技术研发人员：GM埃伦，BM密汉，JA艾利斯，GS克拉考卡，JCF奥登奈特，F麦克内利，
申请(专利权)人：梅瑞尔公司，贝尔法斯特皇后大学，萨斯喀彻温大学，
类型：发明
国别省市：FR[法国]