一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌及其构建与应用制造技术

本发明专利技术涉及代谢工程技术领域，尤其是涉及一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌及其构建与应用。本发明专利技术中，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，导入了甲苯单加氧酶复合体编码基因xylMA、苯甲醛脱氢酶编码基因xylC、甲苯‑4‑磺酸单加氧酶复合体编码基因tsaMB、4‑甲酰基苯磺酸脱氢酶编码基因tsaCD，使大肠杆菌具备大量合成对苯二甲酸的能力。与现有技术相比，本发明专利技术提供的重组大肠杆菌可实现对苯二甲酸在胞外积累，其浓度最高为773.3mg/L。为进一步代谢工程改造大肠杆菌生产对苯二甲酸奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及代谢工程，尤其是涉及一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌及其构建与应用。

技术介绍

1、对苯二甲酸是一种二元芳香羧酸，其分子中两个羧基分别位于苯环的1,4位，化学结构式为c6h4(cooh)2。对苯二甲酸是重要的大宗工业有机原料，主要用于聚酯合成，如聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚对苯二甲酸丙二醇酯、聚对苯二甲酸丁二醇酯，聚酯产品广泛用于纺织、食品包装及塑料薄膜等领域。

2、目前，对苯二甲酸的合成方法主要是化学合成法，以醋酸为溶剂，钴/锰催化剂与溴促进剂共同作用下，空气氧化生成粗对苯二甲酸，再进行精制纯化。通过加氢处理或深度氧化去除杂质，最终得到高纯度对苯二甲酸。此外，对苯二甲酸的生产方法还有生物催化法以及代谢工程法。其中代谢工程法有着代谢途径清晰、反应条件温和、环境污染小等特点，因此具有极大的发展前景。

3、代谢工程法有着反应条件温和、生产绿色环保的特点，同时是一种环境友好型的生产策略。目前，已有研究成功在大肠杆菌dh5α以及恶臭假单胞菌kt2440中通过代谢工程法合成了对苯二甲酸，然而相关研究仍然较少，难以使代谢工程法生产对苯本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌同时编码甲苯单加氧酶复合体基因xylMA、苯甲醛脱氢酶基因xylC、甲苯-4-磺酸单加氧酶复合体基因tsaMB、4-甲酰基苯磺酸脱氢酶基因tsaCD。

2.根据权利要求1所述的一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，甲苯单加氧酶复合体基因xylMA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

3.根据权利要求2所述的一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌株，含有表达载体1和表达载体2；

4.根据权利要求3所述的一种生产对苯二...

【技术特征摘要】

1.一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌同时编码甲苯单加氧酶复合体基因xylma、苯甲醛脱氢酶基因xylc、甲苯-4-磺酸单加氧酶复合体基因tsamb、4-甲酰基苯磺酸脱氢酶基因tsacd。

2.根据权利要求1所述的一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，甲苯单加氧酶复合体基因xylma的核苷酸序列如seq id no.1所示；

3.根据权利要求2所述的一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以大肠杆菌bl21(de3)为出发菌株，含有表达载体1和表达载体2；

4.根据权利要求3所述的一种生产对苯二甲酸的重组大肠杆菌，其特征在于，所述表达载体1为重组质粒ptrc99a-tsamb-trc-tsacd(t)，所述表达载体2为重组质粒pxmj19-xylma-xylc。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵黎明，邓琛，毛晓灿，金佳杨，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：