自扩增RNA构建体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种自扩增RNA构建体，通过该自扩增RNA构建体目标蛋白的表达得到优化。与传统的mRNA和基于肠道病毒的自扩增RNA相比，根据本发明专利技术的基于肠道病毒的优化的自扩增RNA提高了目标蛋白的表达水平。此外，该多抗原自扩增RNA可以同时表达一种或多种目标蛋白，其表达率远高于传统mRNA的表达率。因此，根据本发明专利技术的自扩增RNA构建体可以广泛地用于疫苗等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种自扩增rna构建体及其用途。

技术介绍

1、疫苗在世界范围内通过预防各种疾病的感染和传播，对健康发挥着重要作用。根据世界卫生组织估计，疫苗每年可预防200万至300万死亡。传统疫苗，例如减毒病原体、灭活病原体和亚单位疫苗，已经预防了各种致命疾病。然而，针对各种能够逃避适应性免疫反应的感染性病原体的疫苗的快速研发和大规模推广仍然困难重重。

2、在另一方面，核酸疗法作为能够克服上述问题的替代方案，已引起人们的关注(vogel等人，clin microbiol rev.,8(3):406-410(1995)。尤其是，基于mrna的rna疫苗是安全的，因为它们不像某些病毒疫苗那样整合到基因组中，因此不存在突变的问题，而且它们可以以无细胞的方式制造，允许经济、快速且有效地生产疫苗。此外，单个mrna疫苗的优势在于能够编码多种抗原，从而增强对病原体的免疫反应，并能够逃避体内对运载体的免疫反应。

3、其中，自扩增rna(sarna)疫苗的构建体在非结构蛋白中具有rna聚合酶活性，并通过用抗原蛋白(目的基因，goi)替换结构蛋白来本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种包含编码融合蛋白的核酸序列的多核苷酸，包含：

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述非结构蛋白源自小核糖核酸病毒科病毒的非结构蛋白。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述非结构蛋白包含肠道病毒的P2结构域和P3结构域。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述P2结构域包含2A蛋白酶、2B和2C。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中

6.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述2A蛋白酶包含突变。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述突变是SEQ ID NO：11的氨基酸序列中第87位氨基...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种包含编码融合蛋白的核酸序列的多核苷酸，包含：

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述非结构蛋白源自小核糖核酸病毒科病毒的非结构蛋白。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述非结构蛋白包含肠道病毒的p2结构域和p3结构域。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述p2结构域包含2a蛋白酶、2b和2c。

5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中

6.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述2a蛋白酶包含突变。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述突变是seq id no：11的氨基酸序列中第87位氨基酸的取代。

8.根据权利要求7所述的多核苷酸，其中突变体包含seq id no:75的氨基酸序列。

9.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述p3结构域包含3a、3b、3c蛋白酶和3d聚合酶。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中

11.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点被源自自扩增病毒的非结构蛋白的蛋白酶切割。

12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点被肠道病毒的2a蛋白酶切割。

13.根据权利要求12所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点包含编码seq id no:22的氨基酸序列的核苷酸序列。

14.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸还包含编码第二目标蛋白的核酸序列。

15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点位于所述第二目标蛋白和所述第一目标蛋白之间。

16.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点源自自扩增病毒的非结构蛋白。

17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点被源自小核糖核酸病毒科病毒的蛋白酶切割。

18.根据权利要求17所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点被肠道病毒的2a蛋白酶、3cd蛋白酶或3c蛋白酶切割。

19.根据权利要求18所述的多核苷酸，其中所述蛋白酶切割位点包含编码seq id no:22或seq id no:50的氨基酸序列的核苷酸序列。

20.根据权利要求1或14所述的多核苷酸，其中所述第一目标蛋白和/或所述第二目标蛋白是抗原。

21.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是严重发热伴血小板减少综合征病毒抗原。

22.根据权利要求21所述的多核苷酸，其中所述抗原包含选自由seq id no:45、seq idno:85、seq id no:116和seq id no:119组成的组中的任一个氨基酸序列。

23.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是sars-cov2病毒抗原。

24.根据权利要求23所述的多核苷酸，其中所述抗原包含seq id no:48的氨基酸序列。

25.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是高致病性禽流感病毒抗原。

26.根据权利要求25所述的多核苷酸，其中所述抗原包含seq id no:105的氨基酸序列。

27.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是犬流感病毒抗原。

28.根据权利要求27所述的多核苷酸，其中所述抗原包含seq id no:53或seq id no:56的氨基酸序列。

29.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是人乳头瘤病毒抗原。

30.根据权利要求29所述的多核苷酸，其中所述抗原包含选自由seq id no:139、seqid no:142、seq id no:145和seq id no:148组成的组中的任一个氨基酸序列。

31.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述抗原是肿瘤抗原。

32.根据权利要求31所述的多核苷酸，其中所述肿瘤抗原选自5t4、707-ap、9d7、afp、albzip hpg1、α-5-β-1-整合素、α-5-β-6-整合素、α-辅肌动蛋白-4/m、α-甲基酰基辅酶a消旋酶、art-4、artc1/m、b7h4、bage-1、bcl-2、bcr/abl、β-连环蛋白/m、bing-4、brca1/m、brca2/m、ca 15-3/ca 27-29、ca 19-9、ca72-4、ca125、钙网蛋白、camel、casp-8/m、组织蛋白酶b、组织蛋白酶l、cd19、cd20、cd22、cd25、cd30、cd33、cd4、cd52、cd55、cd56、cd80、cdc27/m、cdk4/m、cdkn2a/m、cea、clca2、cml28、cml66、coa-1/m、毛状样蛋白(cotl1)、xxiii型胶原、cox-2、ct_9/brd6、cten、细胞周期蛋白b1、细胞周期蛋白d1、cypb、cypb1、dam-10、dam-6、dek-can、eftud2/m、egfr、elf2/m、emmprin、epcam、epha2、epha3、erbb3、etv6-aml1、ezh2、fgf-5、fn、frau-1、g250、gage-1、gage-2、gage-3、gage-4、gage-5、gage-6、gage7b、gage-8、gdep、gnt-v、gp100、gpc3、gpnmb/m、hage、hast-2、hepsin、her2/neu、herv-k-mel、hla-a*0201-r17i、hla-a11/m、hla-a2/m、hne、nkx3.1、hom-tes-14/scp-1、hom-tes-85、hpv-e6、hpv-e7、hsp70-2m、hst-2、htert、ice、igf-1r、il-13ra2、il-2r、il-5、未成熟层粘连蛋白受体、激肽释放酶-2(klk2)、激肽释放酶-4(lkl4)、ki67、kiaa0205、kiaa0205/m、kk-lc-1、k-ras/m、lage-a1、ldlr-fut、mage-a1、mage-a2、mage-a3、mage-a4、mage-a6、mage-a9、mage-a10、mage...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋珉硕，白允姬，崔远硕，吴率，
申请(专利权)人：微优尼株式会社，
类型：发明
国别省市：