一种胶原蛋白等电点的检验方法技术

本发明专利技术涉及胶原蛋白等电点检测领域，具体涉及一种胶原蛋白等电点的检验方法。本发明专利技术所提供的一种胶原蛋白等电点的检验方法包括S1溶液配制、S2凝胶制备、S3样品前处理、S4点样、S5等电聚焦电泳、S6固定及染脱色和S7成像及胶图处理7步。其中在S3样品前处理步骤中将离心分段并在每一段离心前都加尿素溶液，这样可以使胶原蛋白样品不易聚集，有利于后续等电聚焦形成正常的条带。在S5等电聚焦电泳步骤中控制电泳条件，使得形成的条带清晰凝聚不松散，利用痕量的胶原蛋白样品就可以准确测定出胶原蛋白样品的等电点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及胶原蛋白等电点检测领域，具体涉及一种胶原蛋白等电点的检验方法。

技术介绍

1、等电点(pi，isoelectric point)是指一个分子表面不带电荷时的ph值。在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物，在重组蛋白药物的工艺研发过程中，可利用这一特性对目标蛋白进行分离纯化，此外蛋白质的稳定性高度依赖ph环境，接近pi时易聚集或变性，检测pi有助于设计药物制剂、储存缓冲液，避免主成分降解或失活。因此，精准的pi检测方法也是生物制品技术转化的关键因素之一。

2、截止目前，胶原蛋白等电点检测手段主要包括等电聚焦电泳(以下简称ief)、等电点沉淀法、毛细管电泳(以下简称cief)等。以上方法各有优劣：cief法虽然有高分辨率与灵敏度，但典型的cief等电点分析是通过检测目标蛋白在280nm下特征吸收进行，而胶原蛋白主要由羟脯氨酸、甘氨酸、脯氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，在S1溶液配制步骤中，所述核黄素溶液的质量体积百分比为0.1％；过硫酸铵溶液的质量体积百分比为10％；尿素溶液的浓度为8M。

3.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，在S1溶液配制步骤中，所述固定液由三氯乙酸11.5g，磺基水杨酸3.5g，加水至100ml混合而成；所述浸泡液由无水醋酸钠20.5g，25％戊二醛2.5ml，无水乙醇125ml，加水至500ml混合而成；所述染色液由考马斯亮蓝R-2500.2g，硫酸...

【技术特征摘要】

1.一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，在s1溶液配制步骤中，所述核黄素溶液的质量体积百分比为0.1％；过硫酸铵溶液的质量体积百分比为10％；尿素溶液的浓度为8m。

3.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，在s1溶液配制步骤中，所述固定液由三氯乙酸11.5g，磺基水杨酸3.5g，加水至100ml混合而成；所述浸泡液由无水醋酸钠20.5g，25％戊二醛2.5ml，无水乙醇125ml，加水至500ml混合而成；所述染色液由考马斯亮蓝r-2500.2g，硫酸铜3.5g，冰醋酸50ml，异丙醇150ml，加水至500ml混合而成；所述脱色液由硫酸铜3.5g，冰醋酸35ml，异丙醇62.5ml，加水至500ml混合而成；所述盐酸溶液的浓度为0.01m。

4.根据权利要求1所述的一种胶原蛋白等电点的检验方法，其特征在于，在s3样品前处理步骤中，所述离心机离心需进行控温处理。

5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：花少伟，朱莎莎，杨南林，徐周洋，
申请(专利权)人：吴中美学生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：