一种德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量PCR检测方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量PCR检测方法，针对传统镜检敏感性低、形态学难以区分近缘种的问题，设计特异性引物对PD‑F/PD‑R、MH5F/MH5R靶向ITS基因，构建重组质粒标准品pMD18‑T‑ITS‑1；建立基于拷贝数计算的绝对定量体系；本发明专利技术最低检测限达个位数拷贝级别，灵敏度较普通PCR大大提升，且与六种常见寄生虫无交叉反应；组内/组间重复性变异系数<3.5%。配套试剂盒含引物、预混液及标准品，可精准检测螺类及宿主样本中的虫体负荷，为德沃里伪下殖吸虫的快速鉴定、防控提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量pcr检测方法。

技术介绍

1、德沃里亚基尼伪下殖吸虫（pseudocatatropis dvoryadkini）又叫德沃里伪下殖吸虫，是1989年俄国人德沃里亚基尼（dvoryadkin）首次俄罗斯远东的南部地区发现。德沃里伪下殖吸虫隶属于扁形动物门（platyhelminthes），吸虫纲（trematoda），棘口目（echinostomida），背孔科（notocotylidea），下殖属（genus catatropis）。越南下殖吸虫是下殖属中的第一种吸虫，以螺作为第一宿主。在此之前，已知的背孔科的吸虫只有大卵圆背孔吸虫（notocotylus magniovatus），由软体动物ceritioidea参与了其生命周期。其他下殖属吸虫的生活史已通过含鳃的螺—bithyniidae gray和hydrobiidae stimpson，以及含肺的扁卷螺科中的rafinesque和chillinidae dall作为第一中间宿主被研究过。在大部分下殖属吸虫中，只有印度下殖吸虫（n. i本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：MH5F/MH5R的序列如SEQ ID NO.3、4所示。

3.如权利要求1所述的德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量PCR检测方法，其特征在于：经测序正确的阳性质粒作为标准品，采用紫外核酸蛋白分析仪对其进行浓度和纯度测定，按公式计算DNA的拷贝数：拷贝数=阿氏常数×质粒浓度/DNA length×660，其中阿氏常数为6.02×1023；将标准品用RNase-free water按照10倍梯度稀释，用移液枪吹打数次...

【技术特征摘要】

1.一种德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于：mh5f/mh5r的序列如seq id no.3、4所示。

3.如权利要求1所述的德沃里伪下殖吸虫实时荧光定量pcr检测方法，其特征在于：经测序正确的阳性质粒作为标准品，采用紫外核酸蛋白分析仪对其进行浓度和纯度测定，按公式计算dna的拷贝数：拷贝数=阿氏常数×质粒浓度/dna l...

【专利技术属性】
技术研发人员：马君，董路，贺君君，邹丰才，杨建发，舒凡帆，王怡丹，张艳，张宇聪，张桐，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：