(-)-α-红没药醇高效生产的热带假丝酵母工程菌株构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了(‑)‑α‑红没药醇高效生产的热带假丝酵母工程菌株构建方法及应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术构建了底盘细胞C.tropicalis DC04‑WG04‑2‑Cat2‑ERG10‑PEX15‑ΔADH1，并在其基础上敲除了基因GPD1，减少甘油的产生，避免了碳代谢分流；同时整合表达了来源于酿酒酵母的线粒体载体蛋白基因YHM2与ATP‑柠檬酸裂解酶基因ACL1，增加了乙酰辅酶A的供应。本发明专利技术还通过5L发酵罐补料分批发酵，使重组热带假丝酵母的(‑)‑α‑红没药醇产量最高达到了38.1g/L，是迄今为止报道的最高产量。此外，本发明专利技术的制备方法具有成本低、效率高、操作简易、前景广等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及(-)-α-红没药醇高效生产的热带假丝酵母工程菌株构建方法及应用，属于微生物。

技术介绍

1、(-)-α-红没药醇(c15h26o，别名左旋没药醇、(-)-α-没药醇)，在化妆品和医药领域都有应用。目前，大多数(-)-α-红没药醇是通过蒸汽蒸馏从秋茄树中提取的，由于其自然栖息地不断缩小，秋茄树的生长繁殖面临较大挑战。因此，通过蒸馏获取(-)-α-红没药醇的方法是不可持续的。

2、尽管(-)-α-红没药醇也可以通过从蒎烯等天然产物开始的半合成方法生产，但所得产品通常含有两种或更多种难以分离的异构体。因此，近几十年来，许多研究致力于将合适的微生物开发成细胞工厂，利用微生物发酵法生产(-)-α-红没药醇。目前，酵母基因编辑系统日趋成熟，其本身具备许多优良特性，如生长周期短、改造方式简易等，不同酵母有不同优势，如热带假丝酵母(candida tropicalis)是一种二倍体非常规酵母，具有细胞生长快、环境耐受能力强、底物范围广等特点，极具工业应用潜力，其中利用热带假丝酵母生产长链二元酸和木糖醇已经实现工业化。因此，热带假丝酵母的特性赋予本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，以经过基因工程改造后的具有(-)-α-红没药醇合成能力的重组热带假丝酵母为出发菌株，其特征在于，敲除了3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因GPD1，并表达线粒体载体蛋白的编码基因和/或ATP-柠檬酸裂解酶的编码基因。

2.根据权利要求1所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，所述线粒体载体蛋白的编码基因是来源于酿酒酵母的线粒体载体蛋白基因YHM2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，所述ATP-柠檬酸裂解酶的编码基因是来源于...

【技术特征摘要】

1.产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，以经过基因工程改造后的具有(-)-α-红没药醇合成能力的重组热带假丝酵母为出发菌株，其特征在于，敲除了3-磷酸甘油脱氢酶的编码基因gpd1，并表达线粒体载体蛋白的编码基因和/或atp-柠檬酸裂解酶的编码基因。

2.根据权利要求1所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，所述线粒体载体蛋白的编码基因是来源于酿酒酵母的线粒体载体蛋白基因yhm2，核苷酸序列如seq id no.3所示。

3.根据权利要求1所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，所述atp-柠檬酸裂解酶的编码基因是来源于酿酒酵母的atp-柠檬酸裂解酶基因acl1，核苷酸序列如seq id no.4所示。

4.根据权利要求1～3任一项所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，使用linker融合表达来源于酿酒酵母的线粒体载体蛋白基因yhm2与atp-柠檬酸裂解酶基因acl1，linker的核苷酸序列如seq id no.6所示。

5.根据权利要求1～3任一项所述的产(-)-α-红没药醇的重组热带假丝酵母，其特征在于，所述基因yhm2与基因acl1由pfba1启动子起始转录；所述pfba1启动...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈献忠，杨海泉，陈玲玲，夏勤诚，沈微，夏媛媛，曹钰，周丽，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：