用于治疗小便失禁的含有来自蜕膜或脂肪的干细胞的细胞治疗剂制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，具体涉及用于治疗小便失禁的含有来自胎盘或月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪组织的干细胞的细胞治疗剂。来自蜕膜的干细胞或者来自脂肪组织的干细胞显示出了使漏尿点压力增加和提高尿道括约肌收缩性的作用，因此作为治疗小便失禁的试剂十分有用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，更具体地，涉及含有来自胎盘或者 月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪组织的干细胞的用于治疗小便失禁的细胞治疗剂。
技术介绍
干细胞指的是不仅具有自我复制能力而且具有分化成至少两个细胞能力的细胞， 它可以分为全能干细胞、多功能性干细胞和多潜能性干细胞。全能干细胞是具有能够发育成一个完整个体的全能性质的细胞，并且在卵母细胞 和精子受精之后直到8细胞阶段时细胞都具有这些特性。当这些细胞被分离并移植到子宫 中时，它们可发育成一个完整个体。多功能性干细胞是来源于外胚层、中胚层和内胚层的能 够发育成不同细胞和组织的细胞，多功能性干细胞来自于在受精4-5天之后产生的胚泡内 的内细胞团。这些细胞被称为“胚胎干细胞”，并可分化成各种其他组织细胞，但不能形成新 的生物体。多潜能性干细胞是这样的干细胞，其仅仅能够分化成针对含有这些细胞的组织 和器官的细胞。多潜能性干细胞首先从成人骨膜中分离(Y.Jiang等人，Nature, 418 :41，2002)， 随后也在其他各种成人组织中发现(C.M.Verfaillie，Trends Cell Biol. ,12 =502,2002) 换言之，虽然骨膜是最广为人知的干细胞源，但是也在皮肤、血管、肌肉和大脑中发现了 多潜能性干细胞(J. G. Tomas 等人，Nat. Cell Biol.，3 778,2001 ；M. Sampaolesi 等人， Science, 301 487, 2003 ；Y. Jiang 等人，Exp. Hematol. ,30 :896，2002)。但是，在成人组织诸 如骨膜中的干细胞非常少，并且在不诱导分化时这些细胞很难培养，从而在缺少专一性筛 选培养基的情况下同样难以培养。也就是说，在体外保持分离的干细胞非常困难。近来发现，脂肪组织成为多潜能性干细胞的新来源(B. Cousin等人，BBRC.，301 1016,2003 ；A. Miranville 等人，Circulation, 110 349,2004 ；S. Gronthos 等人，J. Cell Physiol.，189 54,2001 ；M. J. Seo 等人，BBRC.，328 258,2005)。SP，据报道，通过抽脂术得 到的人脂肪组织中含有一组未分化的细胞，其具有分化成脂肪细胞、成骨细胞、肌细胞和成 软骨细胞的能力(P.A.Zuk 等人，Tissue Eng.，7 211,2001 ；A. M. Rodriguez 等人，BBRC.， 315:255，2004)。脂肪组织具有的优点在于它可以大量提取，因此它作为克服现有技术缺陷 的新的干细胞源而引起注意。而且，近来使用动物模型实验的研究表明，来自脂肪组织的细 胞具有再生肌肉和刺激神经血管分化的能力。因此，这些来自脂肪组织的细胞作为新的干 细胞来源而受到关注。本专利技术的专利技术人以前在含有胶原酶和bFGF的培养基中培养过精细切割的胎盘组 织，从培养液中分离胎盘干细胞，然后使分离的干细胞分化成肌细胞、成骨细胞、神经细胞、 脂肪细胞、软骨细胞和胰腺0细胞(韩国专利申请NO.2007-0101756A)。同时，女性的小便失禁是由尿道和膀胱的松垂引起的，这种松弛是由频繁生育和 老化导致的阴部神经损伤引起的盆底肌肉弱化所造成的。目前，韩国女性小便失禁患者的数目大约为4，000, 000-5, 000, 000,并且随着老龄妇女数目的迅速增加而逐年增加。因此， 女性小便失禁正逐渐成为世界范围内的一个严重的社会问题。为了治疗小便失禁患者，使 用了用于支持尿道和膀胱的注射治疗或者外科手术治疗。目前，作为侵入性方法的外科手 术治疗具有的一个问题是会出现并发症，注射治疗具有的问题是由于其采用昂贵的物质， 因此不容易应用于所有患者，并且其成功率仅为50-60%，从而再次需要注射和外科手术。干细胞注射治疗不需要麻醉，并且干细胞可以很容易地注射到尿道括约肌中。因 此，如果干细胞注射治疗能够改善尿道括约肌的收缩性并提高漏尿点的压力，则干细胞治 疗可有利地用于治疗小便失禁。但是，目前还没有关于将干细胞用于治疗小便失禁的研究。因此，本专利技术的专利技术人付出了许多努力来开发含有干细胞的用于治疗小便失禁的 试剂，结果发现，来自胎盘蜕膜的干细胞或者来自脂肪的干细胞对于小便失禁的治疗是有 效的，由此完成了本专利技术。
技术实现思路
因此本专利技术的主要目的在于提供用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，其含有作为活 性成分的来自胎盘或者月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪的干细胞。本专利技术的另一目的在于提供一种制备用于治疗小便失禁的细胞治疗剂的方法，所 述细胞治疗剂含有作为活性成分的来自胎盘或者月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪的 干细胞。本专利技术又一目的在于提供来自胎盘或者月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪的 干细胞在防止小便失禁上的用途。通过下列详细描述和所附的权利要求书，本专利技术的其他特征和实施方式将更加明显。附图简要说明附图说明图1示出了来自胎盘蜕膜的间叶干细胞(MSC)的形态的显微照片。图2示出了作为来自蜕膜的干细胞的传代数的函数的累计群体倍增水平 (cumulative population doubling level, CPDL)白勺图表0图3示出了形成球形的在SFM培养基中培养的第一代蜕膜细胞的照片。图4示出了通过使用流式细胞仪(FACS)分析来自蜕膜的MSC表面抗原得到的结 果的照片。图5示出了使用标记抗体进行的免疫细胞化学分析结果的照片[A :0CT4 ；B SSEA4 ；以及 C :CD44，CD54 和对照]。图6示出了 0CT4的RT-PCR结果[1道标记物；2道RT_反应对照；3道羊膜干 细胞；4道来自蜕膜的干细胞，以及5道PCR-反应对照]。图7示出了在肌生成中，在MM-3160培养基(用于肌原分化的SKBM培养基)中的 来自蜕膜的干细胞诱导10天时的免疫细胞化学分析(aMyosin-FITC)结果的显微照片。图8示出了裸鼠的阴部神经被切断的照片。图9示出了使用倾斜台测定漏尿点压力的过程的照片(A和B)。图10示出了根据实施例6中得到的结果的漏尿点压力测定的结果的图表(A :4周 时的漏尿点压力，B 8周时的漏尿点压力，N 正常组，D 对照组，PI :实验组1，以及P2 实验组2)。图11示出了根据实施例7中得到的结果的漏尿点压力测定结果的图表(A :4周时 的漏尿点压力，B 8周时的漏尿点压力，N 正常组，D 对照组，Al :实验组1，以及A2 实验 组2)。图12示出了使用器官浴槽测定尿道括约肌收缩性的过程的照片(A和B)。图13示出了根据实施例8中得到的结果的通过电场刺激测定的尿道括约肌收缩 性的图表(A 4周时的尿道括约肌收缩性，B 8周时的尿道括约肌收缩性，N 正常组，D 对 照组，P1 实验组1，以及P2 实验组2)。图14示出了根据实施例8中得到的结果的通过乙酰胆碱给药测定的尿道括约肌 收缩性的图表(A 4周时的尿道括约肌收缩性，B 8周时的尿道括约肌收缩性，N 正常组， D 对照组，P1 实验组1，以及P2 实验组2)。图15示出了根据实施例9中得到的结果的通过电场刺激测定的尿道括约肌收缩 性的图表(A 4周本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，其含有作为活性成分的来自胎盘或者月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪的干细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】KR 2007-11-30 10-2007-0124010一种用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，其含有作为活性成分的来自胎盘或者月经液的蜕膜的干细胞或者来自脂肪的干细胞。2.根据权利要求1的用于治疗小便失禁的细胞治疗剂，其特征在于，来自胎盘蜕膜的 干细胞具有如下特征(a)对⑶29和⑶90显示免疫表现型阳性，但对⑶31和⑶45显示免疫表现型阴性；(b)对0ct4、SSEA-4和Cripto_l显示免疫表现型阳性；(c)附着在塑料上生长，具有圆...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗正灿，李恒永，曹政允，金允正，
申请(专利权)人：RNL生物技术株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]