一种基于慢病毒载体的EpCAM基因高表达载体及其细胞株制造技术

本发明专利技术公开了一种基于慢病毒载体的EpCAM基因高表达载体及其细胞株，属于基因工程和生物技术领域。该载体是将EpCAM基因表达结构连接到载体pCHD‑CMV‑MCS‑EF1‑RFP‑T2A‑puro的多克隆位点Xba1和Nhe1之间，在CMV启动子的驱动下高水平表达，得到重组质粒pCDH‑OE‑EpCAM。将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中，得到重组微生物细胞。将该重组质粒通过Lipo2000转染试剂分别转染结直肠癌细胞株HT‑29和HT‑115后筛选单克隆的方法，获得转基因细胞。本发明专利技术构建了人源EpCAM基因过表达的载体，及其相应过表达EpCAM基因的结直肠癌细胞株，为EpCAM基因与结直肠癌发生、发展的分子机制研究奠定了十分重要的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于慢病毒载体的epcam基因高表达载体及其细胞株，属于基因工程和生物。

技术介绍

1、结直肠癌（colorectal cancer），是排在胃癌、食管癌之后常见的消化系统恶性肿瘤之一，而且其治疗效果比较差。国内在全部恶性肿瘤的调查中发病率和死亡率排在第三位、第五位。在国内，人口老龄化及饮食结构的变化，使其发病率和死亡率比前十年有明显增加，而且往后还有升高的趋势。结直肠癌早期最常用的治疗方法以手术切除癌肿，同时结合一些辅助疗法，但晚期则相反，手术仅作为对患者的姑息治疗方法，或是仅用于消除对患者影响较大的症状。随着医学的发展，靶向治疗和免疫治疗在结直肠癌治疗中的地位日益凸显。

2、上皮特异性黏附分子（epcam）是一个大小为 40k d 的 i 型跨膜糖蛋白，作为结直肠癌特异性抗原的同时，其也是一种肿瘤干细胞抗原。epcam作为一种细胞黏附分子，参与细胞间的黏附和连接，对维持组织的完整性和功能具有重要作用。在结直肠癌中，epcam的异常表达可能导致细胞间黏附力减弱，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。此外，epcam还可能通过影响细胞增殖本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种真核生物表达载体，其特征在于，将EpCAM基因表达结构连接到慢病毒载体pCHD-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-puro骨架结构上，得到重组慢病毒表达载体pCDH-OE-EpCAM；所述EpCAM 基因结构的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示，所述慢病毒表达载体pCHD-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-puro的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示。

2.如权利要求1所述的重组慢病毒表达载体，其特征在于，将所述EpCAM 基因表达结构连接到载体pCHD-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-puro的多克隆位点Xba1和Nhe1之间，在CM...

【技术特征摘要】

1.一种真核生物表达载体，其特征在于，将epcam基因表达结构连接到慢病毒载体pchd-cmv-mcs-ef1-rfp-t2a-puro骨架结构上，得到重组慢病毒表达载体pcdh-oe-epcam；所述epcam 基因结构的核苷酸序列如seq id no .2所示，所述慢病毒表达载体pchd-cmv-mcs-ef1-rfp-t2a-puro的核苷酸序列如seq id no .1所示。

2.如权利要求1所述的重组慢病毒表达载体，其特征在于，将所述epcam 基因表达结构连接到载体pchd-cmv-mcs-ef1-rfp-t2a-puro的多克隆位点xba1和nhe1之间，在cmv启动子的驱动下高水平表达。

3.如权利要求1所述的重组慢病毒表达载体，其特征在于，该载体上含有转基因细胞筛选的标记基因rfp基因结构和puro基因结构在ef1α启动子的驱动下中等水平表达。

4.一种重组微生物细胞，其特征在于，含有权利要求1～3任一所述的重组慢病毒表达载体。

5.如权利要求4所述的重组微生物细胞，其特征在于，所述重组微生...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丙萍，段金凯，
申请(专利权)人：王丙萍，
类型：发明
国别省市：