凡纳滨对虾肝胰腺泡状细胞的分离和体外培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，具体涉及凡纳滨对虾肝胰腺泡状细胞的分离和体外培养方法，包括：S1：获取凡纳滨对虾的肝胰腺；S2：将步骤S1中所述的肝胰腺与胰蛋白酶混合并进行过筛处理，得到过筛液；S3：对步骤S2所述的过筛液进行多次沉淀重悬及Percoll处理，得到细胞悬液；S4：将步骤S3所述的细胞悬液接种到培养基中，封口后置于培养箱中。本发明专利技术通过优化密度梯度离心的方法分离纯化获得的凡纳滨对虾肝胰腺B细胞形态完整，活力较好。B细胞的成功分离有助于研究其在病原体感染中的变化及免疫应答，为后续探究不同类型肝细胞免疫功能差异的分子基础提供了技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养，具体凡纳滨对虾肝胰腺泡状细胞的分离和体外培养方法。

技术介绍

1、肝胰腺(hepatopancreas)是十足目动物重要的多功能器官，是消化道最大的器官，也是主要的代谢器官，同时还是免疫分子的主要来源，肝胰腺的健康关系着对虾个体的免疫状态和生长发育。2022年凡纳滨对虾养殖总量为209.9万吨。近年来，中国凡纳滨对虾养殖技术不断提升，养殖面积日益扩大，产值逐年增加的同时带来巨大的经济效益。但是，复杂而多变的养殖环境因素致使各种寄生虫、病毒和细菌病害频发，严重制约着对虾水产养殖业的发展。它的主要病害如白斑综合征、虾肝肠胞虫、虹彩病毒病等病原以对虾肝胰腺为入侵主要靶点，在肝胰腺中大量增殖，破坏原有肝小管结构，导致肝胰腺白化，降低食用价值，给养殖业带来了巨大的经济损失。

2、作为对虾的重要营养积累和免疫器官，肝胰腺在其免疫反应中发挥重要作用。但是关于不同类型肝胰腺细胞在对虾先天免疫过程中发挥的功能和分子机制尚不清楚。

3、目前研究已确定肝胰腺主要包括4种细胞：①胚细胞(embryonic cells，e细胞)分布在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种凡纳滨对虾肝胰腺泡状细胞的分离和体外培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2所述肝胰腺与胰蛋白酶的混合体积比为5：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2所述的肝胰腺与胰蛋白酶混合并进行过筛处理包括：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述过筛液进行多次沉淀重悬处理，包括：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述HEPES缓冲液的配制为：500mL DNase/RNase-Free Water(无酶水)+7mL HEPES+18g NaC...

【技术特征摘要】

1.一种凡纳滨对虾肝胰腺泡状细胞的分离和体外培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2所述肝胰腺与胰蛋白酶的混合体积比为5：1。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2所述的肝胰腺与胰蛋白酶混合并进行过筛处理包括：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s3所述过筛液进行多次沉淀重悬处理，包括：

5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：丰程程，包杰，杜明会，姜宏波，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：