抗冻/融损害的脂质体组合物制造技术

描述了一种脂质体组合物，它提高了对冻／融损害的防护作用。脂质体组合物含有跨越脂质体脂质双分子层的渗透梯度，其中外部介质的重量克分子渗透浓度高于脂质体内部介质的重量克分子渗透浓度。通常，外部介质包括一种盐和一种低温防护剂，以增加重量克分子渗透浓度。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种脂质体组合物，具有改进的在冷冻和随后的融化之后，防护发生微囊聚集、微囊融合和包容物的损失。有关申请的交叉引用本文引用于1999年7月16日向美国专利与商标局提交的美国临时专利申请No.60/144,380的完整公开内容，专利技术名称为“脂质体组合物的低温防护”。这些申请一般是申请人自有的。
技术介绍
脂质体是用于各种目的的密封脂质微囊。确切地说，通过脂质体的全身给药，脂质体可以用来运送治疗剂到达靶部位或细胞。已经证实脂质体特别可用于缓冲药物毒性和改变某些治疗化合物的药动学参数，例如阿霉素和两性霉素B。结合有这些化合物的产品是市售的。药物脂质体制剂的稳定性和有效贮存是脂质体产品的重要方面。具体来说，重要的是脂质体制剂在适当条件下长期贮存而不发生包封的药物的不当损失或脂质体大小的改变。不过，有种担心是当脂质体被脱水时或者冷冻随后融化时，可能发生微囊融合和/或包容物的渗漏。保护微囊在脱水和冷冻期间完整的通常方法是在脂质体制剂中包括一种低温防护剂，例如糖(Harrigan等《脂质的化学与物理学》52139-149(1990))。低温防护剂保持脂质的完整，防止微囊融合和微囊内容物的损失。例如，美国专利No.4,927,571涉及从冻干形式再生的、含有阿霉素的脂质体组合物，它包括1％至10％的一种低温防护剂，例如海藻糖或乳糖。美国专利No.4,880,635涉及通过在糖的存在下干燥脂质体而制备的脱水脂质体组合物，其中的糖存在于脂质体双分子层膜的内部和外部表面。类似地，美国专利No.5,077,056涉及脱水脂质体组合物，它优选地在脂质体表面的内部和外部包括防护性糖。其他脂质体制剂例如DOXIL，这是一种含有阿霉素的脂质体制剂悬液，其中脂质体不被脱水用于后面的再生，而是在贮存期间留在悬液中。不过，悬液介质通常包括糖，用于防护冷冻损害。专利技术概述因此，本专利技术在一方面提供脂质体组合物，防护经过冷冻和随后的融化之后发生微囊聚集和融合，防护发生包容物的损失。本专利技术在另一方面提供脂质体组合物，与由单独的低温防护剂所提供的防护作用相比，它提高了对冻/融损害的防护作用，这一点可由微囊融合减少和包容物损失减少加以证明。本专利技术进一步提供包埋有高离子强度药物的脂质体组合物，防护在经过冷冻和随后的融化之后发生微囊融合和内容物的损失。本专利技术在另外一方面提供脂质体组合物，它提高了对冻/融损害的防护作用。在一种实施方案中，组合物由脂质体悬液组成，每粒脂质体包埋有具有一定内部重量克分子渗透浓度的水性介质。脂质体是悬浮在外部介质中的，外部介质是由水溶性盐和低温防护剂组成的，其中外部介质的外部重量克分子渗透浓度高于内部脂质体重量克分子渗透浓度，由此建立跨越每粒脂质体的内低/外高渗透梯度。在另一种实施方案中，外部介质包括一种盐，选自硝酸盐、钠盐、钾盐、铵盐和硫酸盐。在优选的实施方案中，盐是氯化钠(NaCl)或氯化钾(KCl)。低温防护剂通常是一种糖，单糖或二糖、甘油、或聚乙二醇。在优选的实施方案中，低温防护剂选自海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、甘油、聚乙二醇和氨基苷类。在另一种实施方案中，组合物进一步包括包埋在脂质体中的治疗剂。在优选的实施方案中，治疗剂是顺铂或顺铂类似物、或其衍生物。在另外一种实施方案中，脂质体组合物包括与亲水性聚合物链衍生的成微囊脂质。本专利技术在另一方面提供用于防护脂质体组合物免遭冻/融损害的方法。该方法包括制备脂质体悬液，悬液中的每粒脂质体包埋有具有一定内部重量克分子渗透浓度的水性介质。脂质体是悬浮在由水溶性盐和低温防护剂组成的外部介质中的，其中外部介质的外部重量克分子渗透浓度高于内部脂质体重量克分子渗透浓度，由此建立跨越每粒脂质体的内低/外高渗透梯度。本专利技术在另外一方面提供用于防护含有金属配位化合物的脂质体组合物冻/融损害的方法。该方法包括制备脂质体悬液，悬液中的每粒脂质体包埋有具有一定内部重量克分子渗透浓度的水性介质和一种包埋的化合物。脂质体是悬浮在由水溶性盐和低温防护剂组成的外部介质中的，其中外部介质的外部重量克分子渗透浓度高于内部脂质体重量克分子渗透浓度，由此建立跨越每粒脂质体的内低/外高渗透梯度。在一种实施方案中，治疗剂是顺铂或顺铂类似物、或其衍生物。在另一种实施方案中，外部介质中的盐是氯化钠(NaCl)，低温防护剂是蔗糖。本专利技术在另外一方面提供用于提高脂质体悬液低温防护作用的方法，在悬液介质中包括低温防护剂。这一改进在悬液介质中包括水溶性盐，以有效建立跨越每粒脂质体的渗透梯度，其中悬液介质的重量克分子渗透浓度高于脂质体内部。在一种实施方案中，渗透梯度至少为100mOsm，优选为大于约200mOsm，更优选为大于约400mOsm，最优选为大于约500mOsm。专利技术的详细说明I、说明本文所用的下列术语具有下列含义“冷却损害”或“冷冻损害”指的是脂质体组合物暴露于足以导致一种不良后果的温度之后发生的若干不良后果的任意一种。足以导致冷冻损害的温度通常是低于约0℃的温度，更常见为低于约-5℃的温度，进而更常见为低于约-10℃的温度。不良后果包括但不限于因微囊聚集和/或融合而致粒径生长增加、和包封治疗剂的损失。能够导致这样一种后果发生的实际温度将因脂质体制剂而异，例如脂质和其他双分子层组分的类型、以及包埋的介质和治疗剂。有时，冷冻损害在极冷的温度下是较小的，特别是如果冷冻和随后的融化速率较快时。本文所用的“冻/融损害”包括与冷冻损害(如上所述)有关的不良副作用，和另外作为至少一个冷冻与融化周期结果所观察到的后果，例如不均匀的粒径分布。所述后果在慢融化过程期间可能更加明显，也就是在约2-8℃，这是相对快融化过程而言的，也就是在室温下，或者水浴条件(例如参见表8)。“低温防护剂”指的是适合于防护脂质体组合物免遭冷冻损害和/或冻/融损害的试剂或化合物。优选的低温防护剂包括例如糖类(二糖和单糖)、甘油和聚乙二醇。本文所报道的“渗透梯度”值是这样测定的，计算脂质体组合物的内部与外部重量克分子渗透浓度，取自于摩尔浓度乘以分子(M×1)内部与外部脂质体介质中的非电解质或每分子电解质的离子数，从外部重量克分子渗透浓度减去内部重量克分子渗透浓度。II、示范性脂质体组合物如上所述，本专利技术涉及抗冷冻损害和/或冻/融损害的脂质体组合物。脂质体组合物具有跨越脂质体脂质双分子层的渗透梯度，其中脂质体外部的悬液介质的重量克分子渗透浓度高于包埋在脂质体内部的介质的重量克分子渗透浓度。例如，实施例1(如下)描述两种脂质体安慰制剂的制备，也就是一种脂质体制剂在内部与外部脂质体介质中都具有低温防护剂蔗糖，另一种脂质体制剂仅在外部介质中含有蔗糖。两种脂质体制剂在脂质体内部与外部介质中含有0.9％重量/体积(w/v)NaCl，脂质体由脂质HSPC、胆固醇和mPEG-DSPE组成，摩尔比分别为51/44/5。将两种脂质体制剂在-20℃下冷冻2.7天(大约65小时)，随后在室温下静置融化。对两种脂质体安慰制剂进行动态光散射，以测定冷冻前后的粒径。结果如表1所示。表1 *平均粒径是对单一样本进行三次测量的标准偏差。在内部与外部介质中含有蔗糖的脂质体制剂(制剂#2)对冷冻损害更敏感，粒径增加证明了这一点，例如从大约116nm(从未冷冻的对照组)增本文档来自技高网...

【技术保护点】
防护冻／融损害的脂质体组合物，包含：脂质体的悬液，其中每粒脂质体含有具有一定内部重量克分子渗透浓度的被包埋的水性介质，该脂质体是悬浮在由水溶性盐和低温防护剂组成的外部介质中的，所述外部介质具有高于内部脂质体重量克分子渗透浓度的外部脂质体 重量克分子渗透浓度，由此建立跨越每粒脂质体的内低／外高的渗透梯度。

【技术特征摘要】
US 1999-7-16 60/144,3801.防护冻/融损害的脂质体组合物，包含脂质体的悬液，其中每粒脂质体含有具有一定内部重量克分子渗透浓度的被包埋的水性介质，该脂质体是悬浮在由水溶性盐和低温防护剂组成的外部介质中的，所述外部介质具有高于内部脂质体重量克分子渗透浓度的外部脂质体重量克分子渗透浓度，由此建立跨越每粒脂质体的内低/外高的渗透梯度。2.权利要求1的组合物，其中该外部介质包括一种盐，选自由硝酸盐、钠盐、钾盐、铵盐和硫酸盐组成的组。3.权利要求1的组合物，其中该低温防护剂是二糖。4.权利要求1的组合物，其中该低温防护剂是单糖。5.权利要求1的组合物，其中该低温防护剂选自由海藻糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、甘油、聚乙二醇和氨基苷类组成的组。6.权利要求2的组合物，其中该盐选自氯化钠(NaCl)和氯化钾(KCl)或其组合。7.权利要求1的组合物，进一步包含包埋在该脂质体中的治疗剂。8.权利要求7的组合物，其中该脂质体包括与亲水性聚合物链衍生的成微囊脂质。9.权利要求8的组合物，其中该治疗剂是顺铂或顺铂类似物或其衍生物。10.用于防护脂质体组合物冻/融损害的方法，包括制备脂质体的悬液，其中该悬液中的每粒脂质体包含具有一定内部重量克分子渗透浓度的被包埋的水性介质，该脂质体是悬浮在由水溶性盐和低温防护剂组成的外部介质中的，所述外部介质具有高于内部脂质体重量克分子渗...

【专利技术属性】
技术研发人员：RM阿布拉，AR迪布尔，
申请(专利权)人：阿尔萨公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]