可视化快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的双重ERA-LFD试剂盒、引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种可视化快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的双重ERA‑LFD试剂盒、引物组及其应用，旨在解决现有检测方法操作复杂、耗时长、依赖专业设备，以及双重ERA引物设计无标准导致的引物交叉干扰、假阳性率高、无法区分单相变种的问题。筛选获得针对fljB基因缺失区和STM4495基因的特异性引物探针组合；构建了双重ERA‑LFD检测体系，在恒温条件下同步扩增双靶标；通过横向流动试纸条双检测线显色模式实现可视化判读。本申请能显著提高检测特异性，有效避免假阳性；实现鼠伤寒沙门菌与单相变种的精准区分；检测过程快速简便，无需专业仪器及人员，适用于现场快速筛查；显著降低检测成本，提升基层应用可行性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物检测，特别是涉及一种可视化快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的era-lfd试剂盒、引物组合及其应用。

技术介绍

1、鼠伤寒沙门菌（ salmonella typhimurium）是食源性疾病的主要病原体之一，其单相变种沙门菌4,[5],12:i:-（以下简称"单相变种"）因鞭毛合成基因簇（如 fljab基因簇）缺失导致ⅱ相鞭毛表达缺陷。近年来，该单相变种已成为人类临床感染、食品动物及猪肉制品污染的主要血清型，尤其在猪群中流行率高（如河南地区病猪感染占比突出），严重威胁着养殖业经济与公共卫生安全。

2、目前，鼠伤寒沙门菌及其单相变种的检测方法主要有常规血清学分型检测，以及分子生物检测法如聚合酶链式反应（pcr法）、荧光定量pcr法和rt-rpa法等，但现有检测技术也存在显著缺陷：①血清学分型法：依赖抗原-抗体反应，操作繁琐、耗时长（24~72h）、人工成本高，且需制备多价抗血清；②分子检测法（如pcr、荧光定量pcr、rt-rpa）：虽灵敏度较高，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可视化快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的双重ERA-LFD引物组，其特征在于，由下列引物组成：

2.一种匹配于权利要求1所述双重ERA-LFD引物组的探针组，其特征在于，包括：

3.一种基于ERA-LFD快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的扩增体系，其特征在于，以总体积50μL计，含浓度为2μM的权利要求1中的上游引物和下游引物各1μL、浓度为2μM的权利要求2中的探针各0.3μL、模板5μL及溶解剂20μL、激活剂2μL、dd H2O余量。

4.权利要求1所述双重ERA-LFD引物组、权利要求2所述探针组或权利要求3所述扩增体系在如下（1）~（...

【技术特征摘要】

1.一种可视化快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的双重era-lfd引物组，其特征在于，由下列引物组成：

2.一种匹配于权利要求1所述双重era-lfd引物组的探针组，其特征在于，包括：

3.一种基于era-lfd快速检测鼠伤寒沙门菌或其单相变种的扩增体系，其特征在于，以总体积50μl计，含浓度为2μm的权利要求1中的上游引物和下游引物各1μl、浓度为2μm的权利要求2中的探针各0.3μl、模...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋增海，姬少佳，徐耀辉，张晓战，陈益，吕玉金，唐光武，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：