一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，包括一对核糖核苷酸嵌入发夹引物、链置换DNA聚合酶、核糖核酸酶、核酸嵌入染料、目标核酸序列，所述的核糖核苷酸嵌入发夹引物由5′端发夹序列、3′端线性序列以及二者间嵌入的核糖核苷酸构成，所述的核糖核酸酶识别切割扩增产物中所嵌入的核糖核苷酸并形成缺口，缺口末端可充当引物进一步延伸和置换，扩增过程中3′端序列可发生分子内杂交的扩增产物能进行自主延伸且可作为底物被其他引物配对延伸，本发明专利技术公开的核糖核酸酶双引物等温扩增方法只需一对引物，具备引物设计简单、高灵敏度和高特异性的优势，具有极大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法。

技术介绍

1、核酸扩增技术是现代分子生物学、医学诊断、病原体检测和基因工程等领域中的核心技术之一。自1985年聚合酶链式反应（pcr）技术问世以来，核酸扩增技术已广泛应用于众多领域。然而，传统的pcr技术依赖于热循环过程，需要大型且昂贵的仪器设备和较长的反应时间，限制了其在现场和便携式检测中的应用。因此，开发一种高效、快速、便携的核酸扩增方法成为研究热点。等温核酸扩增技术（isothermal amplification）因其恒温反应、设备简单、快速便携等优点，逐渐成为面向现场和家庭检测的技术工具。

2、目前，等温核酸扩增方法主要分为两大类，即多引物等温扩增和多酶等温扩增。多酶等温扩增至少需要两种功能性酶共同参与实现在恒温条件下高效扩增核酸的分子诊断方法, 因其操作简单和设备便携从而广泛适用于现场快速检测和家庭使用场景。常见的多酶等温扩增技术包括重组酶聚合酶扩增（rpa）和链置换扩增（sda）等，但其在扩增中存在局限性，如需添加拥挤试剂（如carbowax20m和peg）本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，包括核糖核苷酸嵌入发夹引物与目标核酸序列配对并在链置换DNA聚合酶的作用下延伸、核糖核酸酶介导切割延伸、3′端序列可发生分子内杂交的扩增产物能进行自主延伸且可作为底物被其他引物配对介导指数循环扩增，所述核糖核酸酶双引物等温扩增方法所采用的试剂包含上游核糖核苷酸嵌入发夹引物、下游核糖核苷酸嵌入发夹引物、链置换DNA聚合酶、核糖核酸酶、核酸嵌入染料和目标核酸序列，所述上游或下游核糖核苷酸嵌入发夹引物由5′端发夹序列、3′端线性序列以及二者间嵌入的核糖核苷酸构成，所述5′端发夹序列由两个互补的目标核酸序列位点组成，所述3′端线性序列由单个目...

【技术特征摘要】

1.一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，包括核糖核苷酸嵌入发夹引物与目标核酸序列配对并在链置换dna聚合酶的作用下延伸、核糖核酸酶介导切割延伸、3′端序列可发生分子内杂交的扩增产物能进行自主延伸且可作为底物被其他引物配对介导指数循环扩增，所述核糖核酸酶双引物等温扩增方法所采用的试剂包含上游核糖核苷酸嵌入发夹引物、下游核糖核苷酸嵌入发夹引物、链置换dna聚合酶、核糖核酸酶、核酸嵌入染料和目标核酸序列，所述上游或下游核糖核苷酸嵌入发夹引物由5′端发夹序列、3′端线性序列以及二者间嵌入的核糖核苷酸构成，所述5′端发夹序列由两个互补的目标核酸序列位点组成，所述3′端线性序列由单个目标核酸序列位点组成；

2.根据权利要求1所述的一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，所述5′端发夹序列由两个互补的目标核酸序列位点组成，该目标核酸序列位点的核苷酸数大于等于10，小于等于100，所述3′端线性序列由单个目标核酸序列位点组成，单个目标核酸序列位点的核苷酸数大于等于10，小于等于100。

3.根据权利要求1所述的一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，所述嵌入的核糖核苷酸的数量大于等于1，小于等于25。

4.根据权利要求1所述的一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，所述核糖核酸酶为核糖核酸酶h1（或hi）、核糖核酸酶h2（或hii）、核糖核酸酶h3（hiii）、逆转录病毒核糖核酸酶h。

5.根据权利要求1所述的一种高效核糖核酸酶双引物等温扩增方法，其特征在于，所述目标核酸序列为样本中dna序列、样本中rna序...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁雄，张兰香，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：