【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因编辑，具体涉及一种基于hdr的农作物基因组内碱基替换方法和碱基替换试剂盒。
技术介绍
1、水稻是我国重要的口粮，创制高产优质的水稻品种是目前的重点育种目标之一。利用基因编辑技术创制新的水稻植株是研究基因功能和现代生物育种的常用方法，利用crispr/cas敲除基因，从而联系表型与基因功能的技术已经非常成熟。由于生物体内修复dsb的nhej途径的不准确性，很难对基因进行定向改造。如何高效精准的对目标基因的指定位点完成敲入、替换、或删除是当下crispr/cas中的研究热点之一。
2、单核苷酸多态性(snp)是许多重要农艺性状的遗传基础，对植物基因中特异序列定向替换可以快速获得目标性状，目前有两种方法可实现目标碱基的精确替换。第一种是将碱基编辑器通过将cas蛋白与单链dna脱氨酶结合，可以在基因组的特异位点实现单碱基的替换。现在常见的碱基编辑器有两类分别是cbe(cytosinebase editors)，催化c-t碱基对的转化；abe(adeninebase editors)，催化a到g转换。第二种是通过引导...
【技术保护点】
1.一种农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以农作物基因组为模板，扩增得到同源重组修复的供体模板，所述供体模板包含靶位点附近的同源序列；
2.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，步骤(1)所述靶位点附近的同源序列的长度为200～300bp。
3.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，当以水稻kitaake基因组OsHPPD基因为靶位点时，扩增HPPD位点同源模板左臂的引物对包括HPPD-SNP1-F和HPPD-SNP1-R，扩增HPPD位点同源模板中段的引物对包括HPPD-SNP...
【技术特征摘要】
1.一种农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以农作物基因组为模板，扩增得到同源重组修复的供体模板，所述供体模板包含靶位点附近的同源序列；
2.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，步骤(1)所述靶位点附近的同源序列的长度为200～300bp。
3.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，当以水稻kitaake基因组oshppd基因为靶位点时，扩增hppd位点同源模板左臂的引物对包括hppd-snp1-f和hppd-snp1-r，扩增hppd位点同源模板中段的引物对包括hppd-snp2-f和hppd-snp2-r；扩增hppd位点同源模板右臂的引物对包括hppd-snp3-f和hppd-snp3-r；
4.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，当以水稻kitaake基因组osnrt1.1b基因osnrt1.1b位点为靶位点时，扩增osnrt1.1b位点同源模板左臂的引物对包括nrt1.1b-snp1-f和nrt1.1b-snp1-r，扩增osnrt1.1b位点同源模板右臂的引物对包括nrt1.1b-snp2-f和nrt1.1b-snp2-r；
5.根据权利要求1所述农作物基因组内碱基替换方法，其特征在于，当以水稻kitaake基因组osnrt1.1a基因osnrt1.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢卡斌，左露，袁洋，张建伟，周振滔，吴高兵，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：
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