【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学及基因工程领域，具体地涉及利用循环置换ii类内含子核酶生产环形rna的方法及应用。
技术介绍
1、环形rna(circrna)是真核细胞中稳定且常见的rna分子，通过反向剪接形成。它们通过作为微rna或蛋白抑制剂，调控蛋白活性，甚至被翻译成蛋白质等方式，在生物学中发挥着重要作用。然而，有效地在体内外产生环形rna存在技术挑战。
2、常见的环化方法包括使用t4 rna连接酶连接线性rna，或使用自催化的i类或ii类内含子的置换内含子-外显子(pie)剪接策略。然而，直接使用rna连接酶进行连接通常需要“夹片”序列连接自由末端，形成连接体，从而使大规模生产困难。此外，引入连接酶蛋白可能会使产品纯化变得复杂。已有报道称使用pie方法重新排列的ii类内含子结构域的顺序可以产生环形rna，但pie方法会引入外源的“疤痕”序列，可能影响环形rna的结构和免疫反应，使其不太适合治疗用途。尽管有报道称通过工程改造的i类或ii类内含子的clean-pie生产用于治疗应用，但它涉及人为修改和高通量筛选。
3、...
【技术保护点】
1.一种重组的用于制备环形RNA的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为线性，从5'端到3'端包含可操作性连接的模块Z1、待环化模块Y、模块Z2；
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸具有式I所示结构：
3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述CP II类内含子包括野生型、突变型及衍生物，且具有自剪接活性。
4.一种载体，其特征在于，包含如权利要求1所述的多核苷酸。
5.一种基因工程化的宿主细胞，其特征在于，含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有用于产生权利要求1所述的多核苷酸的编码序列。
6.一...
【技术特征摘要】
1.一种重组的用于制备环形rna的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为线性，从5'端到3'端包含可操作性连接的模块z1、待环化模块y、模块z2；
2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸具有式i所示结构：
3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述cp ii类内含子包括野生型、突变型及衍生物，且具有自剪接活性。
4.一种载体，其特征在于，包含如权利要求1所述的多核苷酸。
5.一种基因工程化的宿主细胞，其特征在于，含有权利要求4所述的载体，或基因组中整合有用于产生权利要求1所述的多核苷酸的编码...
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