基于生物膜仿生传感界面检测外泌体miRNA的生物传感器及其制备方法、应用技术

本发明专利技术公开了一种基于生物膜仿生传感界面检测外泌体miRNA的生物传感器，包括基底和位于基底上的生物膜仿生传感界面；所述生物膜仿生传感界面是由细胞膜碎片与发夹探针H1、H2共同孵育后超声形成细胞膜囊泡，然后将细胞膜囊泡滴加在基底上形成的磷脂双分子层。当目标外泌体的标志物miRNA存在时，其与探针H1发生特异性结合，打开H1的发夹结构并恢复荧光，H1和H2形成双链杂交结构，从而释放出与H1结合的miRNA，miRNA继续与所述生物膜仿生传感界面中未反应的H1杂交，如此循环，实现荧光信号放大，进而利用荧光信号实现对目标外泌体及其标志物miRNA进行检测。本发明专利技术所述生物传感器利用生物膜仿生传感界面将外泌体捕获、miRNA释放及miRNA检测进行集成，只需一步加样即可实现外泌体miRNA的灵敏检测，从而进行疾病诊断。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物传感与生物化学分析领域，具体涉及一种基于生物膜仿生传感界面传感器的构建及其在外泌体mirna检测中的应用。

技术介绍

1、近年来，液体活检技术的发展为乳腺癌的早期诊断提供了新的思路。外泌体是一种30-150 nm的细胞外囊泡，囊泡里面包裹多种生物活性分子。例如，mirna、dna、脂质和蛋白质等。到目前为止，许多研究证明癌细胞可以分泌携带特异性mirna来构建肿瘤微环境或刺激肿瘤转移。其中外泌体mirna与游离mirna相比，外泌体mirna因受到外泌体脂质双分子层的保护，避免酶的降解，能够在体液中稳定存在，并且外泌体还能起到富集作用。因此，外泌体mirna可作为癌症液体活检诊断的标志物，可以用于临床诊断。

2、目前，外泌体mirna的检测方法通常需要将外泌体从复杂的体液中分离，随后裂解外泌体释放出mirna，最后才能进行mirna检测。这一过程步骤繁琐、设备昂贵以及无法处理微量体液。最重要的是在对外泌体进行裂解释放mirna的过程中，容易造成交叉污染以及mirna的降解和损失。因此，开发将外泌体分离、mirna释放及检测集成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于生物膜仿生传感界面检测外泌体miRNA的生物传感器，其特征在于，它包括基底和位于基底上的生物膜仿生传感界面；所述生物膜仿生传感界面是由细胞膜碎片与发夹探针H1、发夹探针H2共同孵育后超声形成细胞膜囊泡，然后将细胞膜囊泡滴加在基底上形成的磷脂双分子层；其中，所述细胞膜碎片为待检测外泌体的同源细胞；

2.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检测外泌体miRNA的生物传感器，其特征在于，所述发夹探针H1是一端修饰胆固醇及淬灭基团，另一端修饰荧光基团的DNA探针，发夹探针H2是一端修饰修饰胆固醇的DNA探针。

3.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检...

【技术特征摘要】

1.基于生物膜仿生传感界面检测外泌体mirna的生物传感器，其特征在于，它包括基底和位于基底上的生物膜仿生传感界面；所述生物膜仿生传感界面是由细胞膜碎片与发夹探针h1、发夹探针h2共同孵育后超声形成细胞膜囊泡，然后将细胞膜囊泡滴加在基底上形成的磷脂双分子层；其中，所述细胞膜碎片为待检测外泌体的同源细胞；

2.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检测外泌体mirna的生物传感器，其特征在于，所述发夹探针h1是一端修饰胆固醇及淬灭基团，另一端修饰荧光基团的dna探针，发夹探针h2是一端修饰修饰胆固醇的dna探针。

3.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检测外泌体mirna的生物传感器，其特征在于，所述生物膜仿生传感界面具有同型识别能力，能够特异性捕获具有相同来源的待检测外泌体，并发生膜融合释放标志物mirna；所述基底的表面带羟基，呈现亲水性。

4.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检测外泌体mirna的生物传感器，其特征在于，待检测外泌体为人乳腺癌细胞外泌体，标志物mirna为mirna-155，细胞膜碎片采用人乳腺癌细胞的细胞膜碎片。

5.根据权利要求1所述的基于生物膜仿生传感界面检测外泌体mirna的生物传感器，其特征在于，发夹探针h1的序列为5’-cholestery-ttt ttt ttt ttt ttt ttt tta ccc cta/ibhq1dt/cac gat tag cat taa ccg tac ttt aat gct aat cgt ga-fam-3’；发夹探针h2的序列为5’ -cholestery-ttt ttt ttt ttt ttt ttt ttc att aaa gta cgg tta atgcta atc gtg acc g...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴婷婷，田露，刘志洪，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：