一种基于CRISPR/Cas9技术构建miR-155基因缺失的DF-1细胞系制造技术

技术编号:46480903 阅读:4 留言:0更新日期:2025-09-26 19:03
本发明专利技术提供了一种基于CRISPR/Cas9技术构建miR‑155基因缺失的DF‑1细胞系,属于基因编辑技术领域。本发明专利技术提供一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除DF‑1细胞系中miR‑155基因,其是根据miR‑155基因序列,设计并合成靶向miR‑155基因的gRNA,然后构建含有所述gRNA的CRISPR‑Cas9重组质粒转入DF‑1细胞中,获得miR‑155基因缺失的DF‑1。用本方法获得的纯合的miR‑155基因缺失细胞株,为进一步进行抗病候选基因miR‑155的功能研究提供有效的细胞研究模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物细胞,具体涉及一种基于crispr/cas9技术构建mir-155基因缺失的df-1细胞系。


技术介绍

1、crispr/cas9系统是来源于细菌和古细菌的一种天然适应性免疫防御机制,以其高效率和准确性著称,该系统通过grna识别并引导cas9核酸酶精确地在基因组特定位点进行切割,产生双链断裂,诱导dna同源重组或非同源末端修复机制,从而实现靶基因位点的删除、替换或插入。近年来广泛应用于动物基因编辑中,crispr/cas9可以靶向几乎任何基因,这为基因功能研究提供了极大的便利。

2、mir-155基因是鸡基因组中一种重要的微小rna(mirna),在免疫调节、病毒防御及肿瘤发生中发挥关键作用。研究表明,mir-155基因通过调控靶基因(如socs1、pi3k/akt通路)影响宿主抗病毒反应,然而,目前对其分子机制的解析仍不充分,主要原因在于缺乏高效的基因敲除工具及稳定的细胞模型。


技术实现思路

1、针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本专利技术之目的就是提供crispr/cas本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可打靶DF-1细胞系中miR-155基因的CRISPR/Cas9敲除载体,其特征在于,所述可打靶DF-1细胞系中miR-155基因的CRISPR/Cas9敲除载体包含pX459-gRNA重组质粒;

2.根据权利要求1所述的CRISPR/Cas9敲除载体,其特征在于,所述筛选的gRNA核苷酸序列为SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4至少一项所示。

3.根据权利要求2所述的CRISPR/Cas9敲除载体,其特征在于,所述CRISPR/Cas9敲除载体由pX459-gRNA1重组质粒和pX459-gRNA4重组质粒组合而成;

4.根据权利要...

【技术特征摘要】

1.一种可打靶df-1细胞系中mir-155基因的crispr/cas9敲除载体,其特征在于,所述可打靶df-1细胞系中mir-155基因的crispr/cas9敲除载体包含px459-grna重组质粒;

2.根据权利要求1所述的crispr/cas9敲除载体,其特征在于,所述筛选的grna核苷酸序列为seq id no.1-seq id no.4至少一项所示。

3.根据权利要求2所述的crispr/cas9敲除载体,其特征在于,所述crispr/cas9敲除载体由px459-grna1重组质粒和px459-grna4重组质粒组合而成;

4.根据权利要求3所述的crispr/cas9敲除载体,其特征在于,所述crispr/cas9敲除载体由px459-grna1重组质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员:成子强文静周德方周静张心悦王卓媛许婉晴郎枫杨亮宇李秋林
申请(专利权)人:山东农业大学
类型:发明
国别省市:

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