用于体内合成人乳寡糖的产物特异性转运蛋白制造技术

本公开涉及一种能够生产所需HMO的基因工程细胞，其中所述细胞表达一种能够从所述细胞中输出所需HMO的转运蛋白。本申请还涉及一种使用该基因工程细胞生产所需HMO的方法。优选地，所述所需HMO具有LNT‑II主链，例如LNT或LNnT。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开涉及一种或多种所需人乳寡糖（hmo）的生产，以及通过基因工程改造合适的细胞，该细胞表达能够从所述细胞中输出所需hmo的转运蛋白。本文所述的基因工程细胞用于所需hmo的生产。

技术介绍

1、设计和构建用于生产由3-6个单糖单元组成的人乳寡糖（hmo）的细菌细胞工厂，对于为未来更复杂的hmo产物提供创新且可扩展的解决方案至关重要。

2、为此，通常将合理的菌株工程改造原理应用于细菌宿主细胞。这些原理通常指：a）将所需的生物合成途径引入宿主；b）增加期望反应中所需供体的相关活性糖的细胞库；c）确保宿主细胞中有足够的乳糖，例如通过乳糖通透酶（例如lacy）的存在；和d）引入异源糖外排转运蛋白以输出所需的新形成的异源寡糖（综述请参阅bych等人, 2019 currentopinion in biotechnology 56:130–137）。

3、步骤d）中描述的底物特异性转运蛋白在生产菌株中的表达在重组hmo生产细胞中引起了越来越多的关注，例如最近描述了发酵程序以及几种新的糖转运蛋白基因，这些基因编码的蛋白质可以促进重组产生的2’-岩本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种能够生产具有乳-N-三糖II（LNT-II，GlcNAc(β1-3)Gal(β1-4)Glc）主链的HMO的基因工程细胞，其中所述细胞包含：

2.根据权利要求1所述的基因工程细胞，其中具有LNT-II主链的HMO选自乳-N-新四糖（LNnT）、乳-N-四糖（LNT）、乳-N-岩藻五糖V（LNFP-V）和6’-唾液酸乳-N-新四糖（LST c）。

3.根据权利要求1或2所述的基因工程细胞，其中所述细胞产生的HMO总摩尔含量的至少85%为LNnT或LNT。

4.根据前述权利要求中任一项所述的基因工程细胞，其中所述细胞产生的HMO总摩尔含量的少于15...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种能够生产具有乳-n-三糖ii（lnt-ii，glcnac(β1-3)gal(β1-4)glc）主链的hmo的基因工程细胞，其中所述细胞包含：

2.根据权利要求1所述的基因工程细胞，其中具有lnt-ii主链的hmo选自乳-n-新四糖（lnnt）、乳-n-四糖（lnt）、乳-n-岩藻五糖v（lnfp-v）和6’-唾液酸乳-n-新四糖（lst c）。

3.根据权利要求1或2所述的基因工程细胞，其中所述细胞产生的hmo总摩尔含量的至少85%为lnnt或lnt。

4.根据前述权利要求中任一项所述的基因工程细胞，其中所述细胞产生的hmo总摩尔含量的少于15%为副产物hmo，例如，所述细胞产生的hmo总摩尔含量的少于15%为lnt-ii。

5.根据前述权利要求中任一项所述的基因工程细胞，其中所述一种或多种糖基转移酶包括β-1,4-半乳糖基转移酶或β-1,3-半乳糖基转移酶，以及任选地β-1,3-n-乙酰葡糖胺基转移酶。

6.根据前述权利要求中任一项所述的基因工程细胞，其中所述工程细胞选自大肠杆菌（escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）、乳酸乳杆菌（lactobacillus lactis）、谷氨酸棒杆菌（corynebacterium glutamicum）、解脂耶氏酵母（yarrowia lipolytica）、巴斯德毕赤酵母（pichia pastoris）和酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）。

7.一种生产hmo产物的方法，其中所述方法包括：

8.根据权利要求7中任一项所述的方法，其中所述hmo产物选自乳-n-新四糖（lnnt）、乳-n-四糖（lnt）、乳-n-岩藻五糖v（lnfp-v...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·帕帕扎基斯，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：