Cas9蛋白突变体及其应用制造技术

本公开涉及基因编辑技术领域，特别涉及Cas9蛋白突变体及其应用。本公开通过在远离催化位点的位置引入突变，诱导Cas9蛋白构象改变，获得新的Cas9蛋白突变体，其只切割Cas9‑sgRNA靶标链，不切割Cas9‑sgRNA非靶标链，可以用于构建新型碱基编辑器，能对哺乳动物细胞基因组进行高效率的碱基编辑。本公开的Cas9蛋白突变体融合3'→5'外切酶TREX2的DNA结合缺失的突变体TX，可以极大地提高配对单切口酶切割产生的3'末端的基因编辑效率，且维持其安全性。

【技术实现步骤摘要】

本公开涉及基因编辑，特别涉及一种cas9蛋白突变体及其应用。

技术介绍

1、crispr/cas系统是细菌体内的一种获得性免疫系统，用来抵御入侵细菌的外源dna，其靶向性、对dna的解旋和切割能力等属性被利用于crispr基因编辑技术的建立。crispr/cas9系统中的cas9是一种核酸内切酶，其靶向性由crrna和tracrrna双rna指导结构及dna靶点pam决定。将crrna和tracrrna整合成为sgrna，构成cas9-sgrna的基因编辑系统。通过在crrna间隔区设计具有匹配序列的sgrna，与pam联合，可以将cas9靶向特定基因组位点，解旋靶点dna，切割靶点dna双链。细胞主要通过非同源末端连接(non-homologousend joining，nhej)和同源重组(homologous recombination，hr)进行dna双链断裂(double strand break，dsb)修复，研究人员利用这一过程进行基因的插入、删除或替换，实现精准的基因编辑。

2、cas9含有与hnh和ruvc内切酶的同源结构域，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Cas9蛋白突变体，其包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中的第921位、922位和/或923位氨基酸残基的突变，所述突变选自以下一种或多种：

2.根据权利要求1所述的Cas9蛋白突变体，其中，所述突变包含：

3.一种Cas9蛋白突变体，其包含SEQ ID NO：35、37、39、41所示氨基酸序列片段，所述突变体显著降低或者消除Cas9蛋白对非靶标链的切割活性；

4.融合蛋白，其包含权利要求1-3任一项所述的Cas9蛋白突变体，和与所述Cas9蛋白突变体融合的异源结构域；

5.复合物，其包含权利要求1-3任一项所述的Cas9蛋...

【技术特征摘要】

1.一种cas9蛋白突变体，其包含seq id no:1所示氨基酸序列中的第921位、922位和/或923位氨基酸残基的突变，所述突变选自以下一种或多种：

2.根据权利要求1所述的cas9蛋白突变体，其中，所述突变包含：

3.一种cas9蛋白突变体，其包含seq id no：35、37、39、41所示氨基酸序列片段，所述突变体显著降低或者消除cas9蛋白对非靶标链的切割活性；

4.融合蛋白，其包含权利要求1-3任一项所述的cas9蛋白突变体，和与所述cas9蛋白突变体融合的异源结构域；

5.复合物，其包含权利要求1-3任一项所述的cas9蛋白突变体或权利要求4所述的融合蛋白，和引导rna；

6.生物材料，其包括以下(a)-(d)中任一种：

7.药物组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的cas9蛋白突变体、权利要求4所述的融合蛋白、权利要求5所述的复...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢安勇，吴新荣，姜瑞瑞，王萌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：