Cas蛋白突变体、融合蛋白及其在基因编辑中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及Cas蛋白突变体、融合蛋白及其在基因编辑中的应用。本发明专利技术研究发现Cas12h蛋白酶复合体在体外具有对双链DNA中的非目标链(NTS)进行特异性切割的能力，从而引发DNA双链的开环。基于这一特性，本发明专利技术进一步开发了Cas12h在体内的基因沉默功能，成功在大肠杆菌中实现了对特定基因的转录和表达的沉默作用。同时，本发明专利技术还开发了基于Cas12h融合蛋白的腺嘌呤碱基编辑器，并通过精细调控碱基编辑器的生长条件、优化肽连接体设计以及合理构建融合蛋白结构，成功在大肠杆菌细胞内实现了DNA水平上A‑T向G‑C的精确碱基转换。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其涉及cas蛋白突变体、融合蛋白及其在基因编辑中的应用。

技术介绍

1、成簇规则间隔短回文重复序列(crispr)及其相关蛋白(crispr-associatedproteins，cas)系统在大多数细菌和古细菌物种中被发现，赋予对入侵噬菌体和质粒的适应性免疫，已深刻变革了生物与生物医学科学领域。近年来，crispr-cas工具箱在分析、诊断分析开发方面的应用引起了广泛关注，因其作为识别和操作核酸的分子机器而展现出强大功能。短期内，crispr支持的检测技术已在临床诊断、生物传感和生物成像中扮演关键角色。随着crispr/cas系统的不断发展，其凭借设计简便、操作性强、编辑活性高及成本低廉等优势，已成为最常用的新型基因编辑技术之一。特别是2类crispr-cas系统中的效应蛋白cas9、cas12和cas13(分别对应ii、v和vi型)，在基因编辑领域具有广泛应用。当与核酸靶标结合后，这些cas核酸酶被激活，产生不同的靶标切割机制。

2、尽管cas9和目前应用广泛的cas12a(又称cas12b的亚型之一)在功能上相似，但本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.Cas12h蛋白的突变体，其特征在于，其包括S93R、Y96R、Q139R、A104R、Y111R、A109R、T334R、P425R、E201R、E409R、S209R、D661R、S678R、T681R、A624R、Q619R、G252R、S526R、K529R中的至少一种突变位点，其野生型的氨基酸序列具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

2.融合蛋白，其特征在于，包括ABEmax蛋白和Cas12h蛋白；

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，其具有如下任一项氨基酸序列：

4.生物材料，其特征在于，包括如下任意一项：

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【技术特征摘要】

1.cas12h蛋白的突变体，其特征在于，其包括s93r、y96r、q139r、a104r、y111r、a109r、t334r、p425r、e201r、e409r、s209r、d661r、s678r、t681r、a624r、q619r、g252r、s526r、k529r中的至少一种突变位点，其野生型的氨基酸序列具有如seq id no.1所示的氨基酸序列；

2.融合蛋白，其特征在于，包括abemax蛋白和cas12h蛋白；

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，其具有如下任一项氨基酸序列：

4.生物材料，其特征在于，包括如下任意一项：

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【专利技术属性】
技术研发人员：刘亮，陈霁云，相文文，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：