一种同时测定血清中花生四烯酸及其11种代谢物的SPE-UPLC-MS/MS的方法技术

本发明专利技术提供一种同时测定血清中花生四烯酸及其11种代谢物的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱的方法，联合甲醇蛋白沉淀和固相萃取的血清样本处理方法，并筛选出最佳的流动相、梯度和色谱柱等色谱条件，实现血清中花生四烯酸及其11种代谢物的高效同步检测，具有灵敏度高、精密度及准确度好、基质无干扰、回收率高等优点，实现血清样本的快速分离分析，可同时适应于人、大鼠、小鼠等多种生物来源的血清样本的分析，适用性广，既可用于基础科学研究中不同表型的大鼠、小鼠的血清测定，也可用于有关疾病的临床患者的血清测定，能够应用于实际生物样本的分析，为相关疾病机制研究和生物标志物探索提供了有效工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析，具体涉及一种同时测定血清中花生四烯酸及其11种代谢物的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱(spe-uplc-ms/ms)的方法，其中，花生四烯酸及其11种代谢物分别为花生四烯酸(ara)、血栓烷b2(txb2)、前列素e2(pge2)、(±)14,15-二羟基二十碳三烯酸((±)14,15-dihet)、(±)8,9-二羟基二十碳三烯酸((±)8,9-dihet)、20-羟基二十碳四烯酸(20-hete)、15(s)-羟基二十碳四烯酸(15(s)-hete)、(±)11-羟基二十碳四烯酸((±)11-hete)、(±)12-羟基二十碳四烯酸((±)12-hete)、(±)5-羟基二十碳四烯酸((±)5-hete)、(±)14,15-环氧二十碳三烯酸((±)14(15)-eet)、(±)8,9-环氧二十碳三烯酸((±)8,9-eet)。

技术介绍

1、花生四烯酸(arachidonic acid,ara)作为多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfatty acid,pufa)的重要一员，自身与其衍生的代谢物在炎症的起始和消退本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种同时测定血清中花生四烯酸及其11种代谢物的SPE-UPLC-MS/MS的方法，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18；色谱柱的长度为50-150mm，优选为100mm；内径为2.1mm；粒径为1.7、1.8或1.9μm，优选为1.7μm。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相A为含0.001％甲酸的乙腈-水溶液，优选地，乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为1-10:99-90，更优选为5:95；所述流动相B为乙腈-水混合溶液，乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为90-99...

【技术特征摘要】

1.一种同时测定血清中花生四烯酸及其11种代谢物的spe-uplc-ms/ms的方法，其特征在于，

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为acquity uplc beh c18；色谱柱的长度为50-150mm，优选为100mm；内径为2.1mm；粒径为1.7、1.8或1.9μm，优选为1.7μm。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相a为含0.001％甲酸的乙腈-水溶液，优选地，乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为1-10:99-90，更优选为5:95；所述流动相b为乙腈-水混合溶液，乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为90-99:10-1，优选为95:5；流速为0.2-0.5ml/min，优选为0.3ml/min；柱温为30-50℃，优选为40℃。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述血清为大鼠的血清、小鼠的血清或人的血清，优选为人的血清。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述经过预处理的血清按照如下方法制备：向血清样品中加入混合内标溶液，混合均匀后，再加入蛋白沉淀剂，涡旋离心后取上清液；将所得上清液先加入固相萃取小柱中，依次采用水和甲醇-水混合溶液进行淋洗，再加入甲醇-乙腈混合溶液作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，氮气流下挥干，加入乙腈-水混合溶液进行复溶，再次离心后，取上清液，待进样；其中，所述蛋白沉淀剂为甲醇或乙腈，优选为甲醇；所述甲醇-水混合溶液中甲醇和水的体积比为1-10:99-90，优选为5:95；所述甲醇-乙腈混合溶液中甲醇和乙腈的体积比为10-99:90-1，优选为20:80；所述乙腈-水混合溶液中乙腈和水的体积比为60-80:40-20，优选为75:25。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述经过预处理的血清按照如下方法制备：向100-300μl血清样品中加入5-30μl混合内标溶液，混合均匀后，再加入300-500μl甲醇，涡旋1-2min，在3-5℃和8000-12000rpm的条件下离心5-15min，取上清液300-500μl先加入固相萃取小柱中，依次采用300-500μl水和500-1000μl体积比为1-10:99-90的甲醇-水混合溶液进行淋洗，再加入500-1000μl体积比为10-99:90-1的甲醇-乙腈混合溶液作为洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，在40-50℃的条件下氮气流下挥干，加入80-120μl体积比为60-80:40-20的乙腈-水混合溶液进行复溶，在3-...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵燕琳，黄忠，朱国辉，位娟，刘启明，
申请(专利权)人：睢宁县人民医院，
类型：发明
国别省市：