一种提高全长Ⅲ型胶原蛋白表达量的方法技术

本发明专利技术涉及一种提高全长Ⅲ型胶原蛋白表达量的方法，属于基因工程领域。发明专利技术将SEQ ID NO.1所示的人全长Ⅲ型胶原蛋白的第15位亮氨酸突变为天冬氨酸，所得突变体在CHO‑S细胞中实现高水平分泌表达。本发明专利技术提供的人全长Ⅲ型胶原蛋白突变体为生物医药、生物材料和化妆品的制备和生产提供依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及一种提高全长ⅲ型胶原蛋白表达量的方法。

技术介绍

1、胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％，在某些生物体中的占比甚至高达80％以上。胶原蛋白作为最丰富的动物蛋白，至今已发现28种类型，ⅰ型胶原蛋白作为人体中最常见的胶原蛋白，主要分布在皮肤、肌腱和骨骼中，ⅱ型主要分布在软骨中，ⅲ型主要分布在皮肤和血管系统中。其中ⅲ型胶原蛋白在修复损伤性皮肤、促进伤口愈合、维护皮肤外观和状况等方面应用广泛，但是随着人的生长，ⅲ型胶原蛋白在皮肤组织中占比逐年下降。

2、目前，获取胶原蛋白的方法主要有2种途径，第一种是动物提取，第二种是基因工程法。但前者获得的胶原蛋白成分较复杂，失去部分生物学活性，纯化难度大，存在免疫原性等问题。近年来，通过基因工程的手段获得重组人胶原蛋白的策略已经成功，但大部分都是以片段为主，大小约为几十kda，且不能体现胶原蛋白的天然结构和功能。因此，通过基因工程的方法开发天然人全长胶原蛋白具有重要的意义。</p>

3、重组本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种人全长Ⅲ型胶原蛋白突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上，将第15位亮氨酸突变为天冬氨酸。

2.含有权利要求1所述突变体的融合蛋白，其特征在于，在权利要求1所述突变体的N端依次连接6×His片段和SEQ ID NO.7所示的信号肽。

3.编码权利要求1所述突变体或权利要求2所述融合蛋白的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。

5.表达权利要求1所述突变体或权利要求2所述融合蛋白或携带权利要求3所述基因或含有权利要求4所述重组质粒的重组CHO细胞。

6.一种重组CHO细胞，其特征在于，以...

【技术特征摘要】

1.一种人全长ⅲ型胶原蛋白突变体，其特征在于，在seq id no.1所示氨基酸序列的基础上，将第15位亮氨酸突变为天冬氨酸。

2.含有权利要求1所述突变体的融合蛋白，其特征在于，在权利要求1所述突变体的n端依次连接6×his片段和seq id no.7所示的信号肽。

3.编码权利要求1所述突变体或权利要求2所述融合蛋白的基因。

4.携带权利要求3所述基因的重组质粒。

5.表达权利要求1所述突变体或权利要求2所述融合蛋白或携带权利要求3所述基因或含有权利要求4所述重组质粒的重组cho细胞。

6.一种重组cho细胞，其特征在于，以cho-s细胞为宿主，以phblv-cmv-mcs-ef1-zsgreen-t2a-puromycin为载体，重组表达权利要求1所述突变体或权利要求2所述融合蛋白。

7.如权利要求6所述重组cho细胞，其特征在于，所述重组cho细胞的构建方法为：在质粒phb...

【专利技术属性】
技术研发人员：关欣，张吉，李沁炜，周景文，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：