一种基于自组装的DNA分子量标准的制备方法技术

本发明专利技术公开一种基于自组装的DNA分子量标准的制备方法，包括以下步骤：S1：通过化学合成长度相等但不完全互补的两条单链DNA，且各自均由两部分序列组成：一部分为互补序列，另一部分为自组装互补序列；S2：混合于反应缓冲液中发生定向自组装，加入连接酶；S3：室温下反应0.5‑10min，通过控制反应时间调控自组装次数，每次连接增加与单链DNA碱基数量相等的碱基数，形成多个序列长度等差递增的DNA分子量标准；S4：热失活处理；S5：加入电泳上样缓冲液，配制成DNA分子量标准，低温下保存。本发明专利技术采用一锅法快速制备DNA分子量标准，具备流程简单，制作成本低，拓展性强等优点，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，具体涉及一种基于自组装的dna分子量标准的制备方法。

技术介绍

1、dna 分子量标准是一系列混合了不同分子量大小的dna片段标准品试剂。在分子生物学领域中，dna 分子量标准是用来标定待测dna片段分子量的试剂；具体的标定方法为，将dna分子量标准与待测dna片段在同一块琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺上进行电泳实验，dna 分子量标准中已知长度的dna片段形成梯度分布的条带，指示未知大小的待测dna片段的大小与分布。

2、在分子生物学实验中，由于dna 分子量标准是一种使用频率较高和消耗量较大的必备试剂，因此对于其制备的需求很大，要求制作成本低，指示准确度高，多样性要求高。

3、现有技术中，dna 分子量标准制备的方法主要有两种，分别是pcr扩增和酶切质粒。其中，pcr扩增的主要原理是设计引物，通过模板dna按照所需的长度进行扩增，扩增后进行纯化，最后将得到的不同dna片段进行混合；酶切质粒的主要原理是设计一对引物，通过模板进行扩增，得到dna片段。然而，针对特殊修饰的dna 分子量标准，如荧光标记，或者是单链d本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于自组装的DNA分子量标准的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链DNA的碱基数量相等，且该碱基数量决定由此制备的DNA分子量标准的序列长度差异。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链DNA的长度在20-100nt之间。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链DNA的两部分的序列长度不固定。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，若制备单链DNA分子量标准，其中一条DNA链的5‘端修饰有磷酸基团；若制备双链DNA分子量标准，...

【技术特征摘要】

1.一种基于自组装的dna分子量标准的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链dna的碱基数量相等，且该碱基数量决定由此制备的dna分子量标准的序列长度差异。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链dna的长度在20-100nt之间。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述两条单链dna的两部分的序列长度不固定。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，若制备单链dna分子量标准，其中一条dna链的5‘端修饰有磷酸基团；若制备双链dna分子量标准，两条dna链的5‘端均修饰有磷酸基团。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述连接酶为具有dna连接功能的酶，选自：t4 dna连接酶、t3 dna连接酶、t7 dna连接酶、taqdna连接酶、9°n dna ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佳斌，程和美，夏凯，樊春海，
申请(专利权)人：祥符实验室，
类型：发明
国别省市：