一种构建抗菌肽Apidaecin IB高表达基因工程菌的方法技术

本发明专利技术公开一种构建抗菌肽Apidaecin IB高表达基因工程菌的方法，包括步骤一、根据扩增模板编码区DNA序列，设计三对引物对其进行PCR扩增，并在大肠杆菌中构建表达质粒；步骤二、对工程菌酿酒酵母CENPK2进行扩增培养并制备酿酒酵母感受态细胞，分装冷藏备用；步骤三、将构建的表达质粒酶切并与酿酒酵母CENPK2感受态细胞进行混合转化，得到抗菌肽Apidaecin IB高表达基因工程菌CENPK2‑Apidaecin IB‑Ty1Cons2；本发明专利技术通过整合Ty1Cons2转座子到酿酒酵母CENPK2，完成抗菌肽Apidaecin IB高表达基因工程菌的构建，以实现多拷贝。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物，尤其涉及一种构建抗菌肽apidaecin ib高表达基因工程菌的方法。

技术介绍

1、目前，多种新型抑菌剂已被发现并逐步应用于实践，以解决抗生素的滥用导致了严重的细菌耐药性问题，包括噬菌体制剂、酶制剂、植物提取物、中草药制剂以及抗菌肽等，其中，抗菌肽因其独特的优势成为“替抗领域”的研究热点，被认为是最具应用潜力的抗生素替代品。

2、天然抗菌肽是由有机体自主产生，通过萃取、浓缩、提纯而获得的一类小分子阳离子多肽，具备多种杀菌机制，呈现出高效、广谱的杀菌特性，在抑制耐药性细菌、制备新型抗菌素等方面具有重要的研究价值；在医学领域，抗菌肽可用于治疗多重耐药菌感染，特别是在皮肤感染、呼吸道感染和肠道感染等方面具有潜在应用价值；在畜牧业中，抗菌肽作为饲料添加剂可以替代抗生素，减少抗生素在食品链中的残留；在农业方面，抗菌肽可用于植物保护，抑制病原菌的生长，减少化学农药的使用。

3、抗菌肽apidaecin ib是膜翅目昆虫经感染诱导产生的，最早是从蜜蜂(apismellifera)血淋巴中分离得到的一类小分子短肽，其由18本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构建抗菌肽ApidaecinIB高表达基因工程菌的方法，所述抗菌肽ApidaecinIB的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种构建抗菌肽ApidaecinIB高表达基因工程菌的方法，其特征在于：所述步骤一中的pUC57-Ty1Cons2-TEF-alphadel57-70-CLP1x2-FLAG、pPICZaA-HSAD2-D3-Apidaecin IB均通过基因合成获得，并保存于-20℃冰箱中，核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种构建...

【技术特征摘要】

1.一种构建抗菌肽apidaecinib高表达基因工程菌的方法，所述抗菌肽apidaecinib的氨基酸序列如seq id no.1所示，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种构建抗菌肽apidaecinib高表达基因工程菌的方法，其特征在于：所述步骤一中的puc57-ty1cons2-tef-alphadel57-70-clp1x2-flag、ppiczaa-hsad2-d3-apidaecin ib均通过基因合成获得，并保存于-20℃冰箱中，核苷酸序列分别如seq id no.2、seq id no.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种构建抗菌肽apidaecinib高表达基因工程菌的方法，其特征在于：所述步骤一中的三对引物为primer1和primer2、primer3和primer4、primer5和primer6，核苷酸序列分别如sedid no.5、sedid ...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晨，张美玲，宋佳，孙博，刘宽博，
申请(专利权)人：国家粮食和物资储备局科学研究院，
类型：发明
国别省市：