利用黄瓜基因CsRBOHD提高黄瓜子叶节胚状体再生效率制造技术

本发明专利技术公开了一种利用黄瓜基因CsRBOHD提高黄瓜子叶节胚状体再生效率，本发明专利技术鉴定了一个新的提高黄瓜子叶节胚状体再生率的基因CsRBOHD，通过利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首次成功获得CsRBOHD基因敲除的纯合突变体株系，并对突变体种子进行胚性愈伤培养和胚状体诱导，结果表明该突变体株系显著提高了黄瓜子叶节胚状体再生效率。本发明专利技术对于提升黄瓜体细胞胚胎发生效率及胚状体再生能力具有重要的理论和实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物基因工程，具体涉及利用黄瓜基因csrbohd提高黄瓜子叶节胚状体再生效率。

技术介绍

1、黄瓜(cucumis sativus l.)是重要蔬菜作物。目前黄瓜离体组织再生体系主要通过器官发生途径，但存在基因型依赖性强、转化效率低等问题，难以满足基因功能验证及转基因、基因编辑育种需求。

2、体细胞胚胎发生是植物再生的重要途径之一，与器官发生相比，其再生体系更适用于体细胞突变体筛选、原生质体诱导等研究领域。同时，体细胞胚胎比受精卵更易获得并可批量生产，因此成为研究胚胎发育机制的重要体系，也是人工种子制备的基础。然而，黄瓜的体细胞胚胎发生体系仍存在愈伤组织诱导率低、培养周期长、出胚率低等难题。优化体细胞胚胎发生体系、创制具有高频胚状体再生能力的新种质，是突破遗传转化与组织再生瓶颈的关键。目前提高黄瓜子叶节胚状体再生效率主要方式是改变激素配比，或者筛选高再生的黄瓜品种，现有报道中未涉及基因编辑。

技术实现思路

1、专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术提供一种提高黄瓜子叶节胚本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高黄瓜子叶节胚状体再生率的基因CsRBOHD，其特征在于，所述基因CsRBOHD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种基于权利要求1所述的提高黄瓜子叶节胚状体再生率的基因CsRBOHD的基因敲除载体CsRBOHD-CRISPR/Cas9。

3.根据权利要求3所述的基因敲除载体CsRBOHD-CRISPR/Cas9，其特征在于，所述基因敲除载体CsRBOHD-CRISPR/Cas9构建方法为设计CsRBOHD的靶基因序列CsRBOHD-Target1和CsRBOHD-Target2；根据靶标序列设计扩增引物CsRBOHD-Primer-F和C...

【技术特征摘要】

1.一种提高黄瓜子叶节胚状体再生率的基因csrbohd，其特征在于，所述基因csrbohd的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种基于权利要求1所述的提高黄瓜子叶节胚状体再生率的基因csrbohd的基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9。

3.根据权利要求3所述的基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9，其特征在于，所述基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9构建方法为设计csrbohd的靶基因序列csrbohd-target1和csrbohd-target2；根据靶标序列设计扩增引物csrbohd-primer-f和csrbohd-primer-r；以csrbohd-primer-f和csrbohd-primer-r为引物，pcbc-dt1t2为模板扩增双靶目标片段，将目标片段连接到载体上，通过转化，提取质粒，最终得到基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9。

4.根据权利要求3所述的基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9，其特征在于，所述基因敲除载体csrbohd-crispr/cas9构建中csrbohd-target1、csrbohd-target2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽丽，刘筱玮，杨晓东，周蔚，马银波，许学文，齐晓花，陈学好，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：