一种沙门氏菌的分子检测方法及其应用技术

本发明专利技术涉及沙门氏菌检测技术领域，具体为一种沙门氏菌的分子检测方法及其应用，包括以下步骤：步骤S1、样本处理：提取待检测样本中的DNA；步骤S2、引物设计与合成：针对沙门氏菌的invA基因、hilA基因和stn基因设计特异性引物；步骤S3、多重PCR反应：以步骤S1提取的DNA为模板，采用步骤S2的引物进行多重PCR扩增；步骤S4、荧光探针杂交：将步骤S3的PCR扩增产物与荧光标记探针杂交；步骤S5、荧光信号检测：通过荧光检测仪检测杂交后的荧光信号，根据信号判定样本中是否含有沙门氏菌。本发明专利技术提供的沙门氏菌分子检测方法，采用多重PCR结合荧光探针杂交的技术，能够同时检测沙门氏菌的多个保守基因，提高了检测的特异性和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及沙门氏菌检测，具体为一种沙门氏菌的分子检测方法及其应用。

技术介绍

1、沙门氏菌是一种常见的革兰氏阴性肠道致病菌，广泛存在于自然界中，可通过污染食物、水源等途径感染人类和动物，引起发热、腹泻、腹痛等症状，严重时甚至会导致败血症、脑膜炎等并发症，对公共卫生和食品安全构成了严重威胁。

2、目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养法、免疫学方法和分子生物学方法等。传统培养法是沙门氏菌检测的金标准，但其检测周期长，从样本处理到得出结果需要4-7天，且容易受到杂菌污染的影响，灵敏度较低。免疫学方法如酶联免疫吸附试验(elisa)等，虽然具有操作简便、检测速度快等优点，但该方法依赖于抗体的特异性和敏感性，容易出现假阳性或假阴性结果，且无法对沙门氏菌进行准确的分型和鉴定。分子生物学方法如聚合酶链式反应(pcr)等，具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点，但传统的pcr方法只能针对单一的靶基因进行检测，无法同时检测多种沙门氏菌血清型，且需要进行电泳等后续操作，操作相对繁琐，难以实现高通量检测。

3、综上所述的问题，为此，我们提出一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤S1中所述样本包括食品样本、临床样本或环境样本；所述DNA提取方法为磁珠法、柱提法或试剂盒法。

3.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤S3所述多重PCR反应体系为：2×PCR缓冲液10μL、dNTPs2μL、各对引物各1μL、TaqDNA聚合酶0.5μL、模板DNA5μL，ddH2O补足至20μL；

4.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤S4所述杂交反应在...

【技术特征摘要】

1.一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤s1中所述样本包括食品样本、临床样本或环境样本；所述dna提取方法为磁珠法、柱提法或试剂盒法。

3.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤s3所述多重pcr反应体系为：2×pcr缓冲液10μl、dntps2μl、各对引物各1μl、taqdna聚合酶0.5μl、模板dna5μl，ddh2o补足至20μl；

4.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤s4所述杂交反应在含0.5mnacl、10mmtris-hcl(ph7.5)、1mmedta的杂交缓冲液中进行，反应条件为60℃孵育30min。

5.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌的分子检测方法，其特征在于，所述步骤s5中所述荧光信号判定标准为：同时检测到inva、hila和stn三个...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡海明，张旭，林勇文，林惠泉，郭欣，
申请(专利权)人：福建省漳州市医院，
类型：发明
国别省市：