多肽、抗体可变域和拮抗剂制造技术

本发明专利技术涉及能抵抗蛋白酶降解的抗－ＶＥＧＦ多肽和抗体单可变域（ｄＡｂ），以及含有这些的拮抗剂。多肽、ｄＡｂ和拮抗剂可用于肺部给药、口服给药，递送至患者的肺和递送至患者的ＧＩ道，以及用于治疗癌症和炎症，如关节炎。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利说明多肽、抗体可变域和拮抗剂 本专利技术涉及蛋白酶抗性多肽、免疫球蛋白(抗体)单可变域和包含这些的血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂。本专利技术进一步涉及含有该抗-VEGF配体的用途、制剂、组合物和装置。
技术介绍
多肽和肽日益成为各种应用中的重要制剂，这些应用包括工业应用和用作医学、治疗和诊断试剂。然而，在特定的生理学情况中，如癌症和炎症(例如，COPD)状况中，组织、器官或动物(例如，在肺中，在肿瘤中或邻近肿瘤)中存在的蛋白酶含量将增加。这种蛋白酶的增加会导致内源蛋白质以及给药来治疗疾病的治疗肽、多肽和蛋白质加速的降解和失活。因此，对体内使用(例如，用于治疗、诊断或预防疾病)具有潜能的一些药剂仅仅具有有限的功效，因为它们受到蛋白酶的快速降解和灭活。 蛋白酶抗性多肽提供了若干优势。例如，蛋白酶抗性多肽在体内能比蛋白酶敏感性药剂保持更长时间的活性，因此，能将功能保持足以产生生物效应的时间段。对于选择能抵抗蛋白酶降解并且还具有理想生物活性的多肽的改进方法还存在着需求。 VEGF 由于其初级转录产物可替换的剪接，VEGF是以几种可替换形式存在的分泌的、结合肝素的、同型二聚的糖蛋白(Leung等，1989，Science2461306)。由于其诱导血管渗漏(炎症中的一个重要过程)的能力，VEGF还称为血管通透因子(VPF)。 促进肿瘤形成、转移和复发的一个重要病理生理学过程是肿瘤血管生成。该过程由肿瘤表达的血管生成因子的精心作用来介导，血管生成因子如VEGF，其诱导将营养物质输送给肿瘤的血管形成。因此，治疗特定癌症的一种方法是抑制由VEGF介导的肿瘤血管生成，因此使肿瘤饿死。阿瓦斯丁(AVASTIN)(bevacizumab；Genetech，Inc.)是已经批准用于治疗结直肠癌的结合人VEGF的人源化抗体。报道了称为抗体2C3的抗体(ATCC登录号No.PTA 1595)能结合VEGF并抑制VEGF与表皮生长因子受体2的结合。 用目前可获得的治疗方法靶向VEGF并不是对所有患者或对所有癌症都有效的。因此，对用于治疗由VEGF介导的癌症或其他病理状况的改良药剂存在着需求，这些病理状况包括血管增殖性疾病(例如，年龄相关性黄斑变性(AMD))。 VEGF还涉及炎症和自体免疫疾病。例如，在RA患者滑液组织中的VEGF鉴定突出了VEGF在RA病理学中的潜在作用(Fava等，1994，J.Exp.Med.180341346；Nagashima等，1995，J.Rheumatol.221624-1630)。在鼠胶原性关节炎(CIA)模型中给药抗-VEGF抗体的研究后，VEGF在RA病理学中的作用得到了具体化。在这些研究中，在疾病诱发时，关节中的VEGF表达提高，并且抗-VEGF抗血清的给药阻断了关节炎疾病的发展和改善了已确定的疾病(Sone等，2001，Biochem.Biophys.Res.Comm.281562-568；Lu等，2000，J.Immunol.1645922-5927)。 因此，靶向VEGF在治疗RA和其他病症(例如，与炎症和/或自体免疫疾病相关的那些)中也是有益的。 专利技术概述 在一个方面中，本专利技术提供了含有与DOM 15-26-593(显示于图5中)的氨基酸序列为至少97％同一性的氨基酸序列的多肽。在一个实施方案中，同一性百分比为至少98或99％。在一个实施方案中，多肽是DOM 15-26-593。本专利技术进一步提供了(基本上)纯的DOM 15-26-593单体。在一个实施方案中，DOM 15-26-593为至少98、99、99.5％纯或100％纯的单体。 在一个方面中，本专利技术提供了一种多肽(例如，是蛋白酶抗性的)并且是由与DOM 15-26-593(显示于图5中)的氨基酸序列为至少80％同一性的氨基酸序列编码的。在一个实施方案中，同一性百分比为至少70、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。在一个实施方案中，蛋白酶抗性多肽通过在此描述的用于分离蛋白酶抗性多肽的方法可获得。 在一个方面中，本专利技术提供了由与DOM 15-26-593的核苷酸序列的核苷酸序列为至少55％同一性的氨基酸序列编码的多肽，并且其中该多肽包含与DOM 15-26-593的氨基酸序列的氨基酸为至少97％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，核苷酸序列的同一性百分比为至少60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。在一个实施方案中，氨基酸序列的同一性百分比为至少98或99％或100％。例如，核苷酸序列可以是DOM 15-26-593核苷酸序列的密码子优化形式。序列的密码子优化是本领域已知的。在一个实施方案中，对于在细菌(例如，大肠杆菌(E.coli)或假单胞菌属(Pseudomonas)，例如，荧光假单胞菌(P fluorescens))、哺乳动物(例如，CHO)或酵母宿主细胞(例如，毕赤酵母属(Picchia)或酵母属(Saccharomyces)，例如，巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)或酿酒酵母(S.cerevisiae))中的表达，将核苷酸序列优化。 在一个方面中，本专利技术提供了含有本专利技术多肽的融合蛋白。 在一个方面中，本专利技术提供了抗-VEGF免疫球蛋白单可变域，其包含与DOM 15-26-593的氨基酸序列为至少97％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，同一性百分比为至少98或99％。 在一个实施方案中，免疫球蛋白单可变域在位置6包含缬氨酸，其中编号是根据Kabat(“Sequences of Proteins of Immunological Interest”(免疫学重要性蛋白的序列)，US Department of Health and HumanServices(美国卫生和人类服务部)，1991)。 在一个实施方案中，免疫球蛋白单可变域在位置99包含亮氨酸，其中编号是根据Kabat。 在一个实施方案中，免疫球蛋白单可变域在位置30包含赖氨酸，其中编号是根据Kabat。 在一个方面中，本专利技术提供了抗-VEGF免疫球蛋白单可变域，其包含与DOM 15-26-593的氨基酸序列相同的氨基酸序列。 在一个方面中，本专利技术提供了由与DOM 15-26-593的核苷酸序列为至少80％同一性的核苷酸序列编码的抗-VEGF免疫球蛋白单可变域。在一个实施方案中，同一性百分比为至少70、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。 在一个方面中，本专利技术提供了由与DOM 15-26-593的核苷酸序列的核苷酸序列为至少55％同一性的氨基酸序列编码的抗-VEGF免疫球蛋白单可变域，并且其中可变域包含与DOM 15-26-593的氨基酸序列为至少97％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，核苷酸序列的同一性百分比为至少60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。在一个实施方案中，氨基酸序列的同一性百分比为至少98或99％或100％。例如，核苷酸序列可以是DOM 15-26-593核苷酸序列的密码子优化形式。序列的密码子优化是本领域已知的。在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗－ＶＥＧＦ免疫球蛋白单可变域，其含有与ＤＯＭ　１５－２６－５９３的氨基酸序列（显示于图５中）为至少９７％同一性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M斯图尔德，M普佩卡，I汤林森，C埃内弗，L耶斯珀斯，TD巴图万加拉，
申请(专利权)人：杜门蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]