一种贯叶连翘提取物的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种从贯叶连翘或其同属其它植物中制备含金丝桃素类、贯叶金丝桃素和黄酮类三大活性成分，且活性成分总含量≥５０％的提取物的方法。利用金丝桃素类、贯叶金丝桃素与黄酮类三个主要有效成分的极性差异，选择非极性溶剂从极性溶剂总提取液中进行两相萃取方法将其分离，再利用有效成分的酸碱性差异分别纯化，分别得到高含量金丝桃素类和黄酮类的提取物Ａ和高含量贯叶金丝桃素的提取物Ｂ。溶解法合并两种提取物即得到三大类活性成分总含量不低于５０％的贯叶连翘提取物。该提取物具有显著的抗抑郁活性，可作为以贯叶连翘为药材生产的抗抑郁药物或功能食品的原料。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种从贯叶连翘或其同属其它植物中制备含金丝桃素类、贯叶金丝桃素和黄酮类三大活性成分，且活性成分总含量≥50％的提取物的方法。
技术介绍
贯叶连翘(又称贯叶金丝桃)Hypericum perforatum L.是藤黄科金丝桃属植物。金丝桃素、贯叶金丝桃素与黄酮类化合物是其抗抑郁或抗焦虑的主要活性成分或药效成分。贯叶连翘提取物在德国已经临床用于治疗中、轻度抑郁症。金丝桃素(Hypericin)具有抗病毒、抗肿瘤、抗抑郁等药理作用。分子量504.43，为蓝黑色针状结晶(吡啶—含HCl甲醇)，熔点320℃(分解)，易溶于吡啶或其他有机胺类呈橙红色并带红色荧光，不溶于多数有机溶剂，可溶于碱性水溶液。对光、氧不稳定。天然金丝桃素的植物来源主要是金丝桃属植物，包括贯叶连翘Hypericum perforatum L.、连州小连翘H.lianzhouense、赶山鞭H.attenuatum、小连翘H.erectum、滇南金丝桃Hypericum austroyunnanicum，等。贯叶金丝桃素(Hyperforin)具有抗抑郁和抗菌作用。Muller等证明贯叶金丝桃素在纳摩尔浓度(10-9mol/l)水平不但能抑制5-HT，NE，DA的再摄取，而且还能诱导皮质β-肾上腺素受体表达的负调控。和其他传统的5-HT，NE抑制剂不同的是，贯叶金丝桃素能抑制所有三种单胺。Bhattacharya等研究表明，贯叶金丝桃素与抗抑郁药及抗焦虑药在动物抑郁的实验模型中的活性类似，贯叶金丝桃素能提高在强迫游泳实验和非帮助学习实验中动物抗抑郁的能力。其分子量536.77，熔点79~80℃，对光、热和空气不稳定，易氧化。贯叶连翘中黄酮类化合物含量为9.25％，多以甙类形式存在，主要包括黄酮醇甙、黄酮醇、双黄酮、原花青素和咕吨酮类。黄酮醇甙有金丝桃甙、芦丁、异槲皮甙、槲皮甙，黄酮醇有槲皮素，以及山奈黄素(kaempferol)、杨梅黄素(myricetin)。黄酮醇类，尤其黄酮醇甙元具有解痉活性，而且显示明显的体外MAO-A(单胺氧化酶-A)抑制作用，如槲皮素、山奈黄素和槲皮甙。黄酮类，尤其是不含3-OH的黄酮类，能与benzodiazepin受体结合，推测贯叶连翘中的黄酮类也以这种方式发挥作用。贯叶连翘中黄酮类化合物的结构与MAO抑制剂类抗抑郁药toloxtone和溴法罗明(brofaromine)相似。贯叶连翘中发现两种二聚黄酮化合物I3，II8-Biapigenin(0.1-0.5％)和阿曼托黄素(I3’，II8-Biapigenin，0.01-0.05％)。它们仅存于芽和花中，具有中枢镇静活性，阿曼托黄素在体外与脑benzodiazepin受体结合，显示部分激动剂效应，其亲和力与地西泮(diazepam)相似。咕吨酮是藤黄科植物的典型成分。贯叶连翘根部含0.01％的kielcorin，叶和茎中含痕量的1，3，6，7-四羟基咕吨酮。1，3，6，7-四羟基咕吨酮在95μmol/L的浓度可99％抑制MAO-A。目前，贯叶连翘提取物的制备方法有多种，以乙醇为溶剂的提取方法最为常用，该法的缺点是，提取物中金丝桃素的含量低，而原料中金丝桃素的含量随产地，品种，采集期的不同又有很大差异(0.01-0.06％)，有时难以得到合格产品。用氢氧化钠溶液的提取方法，尽管有着成本低廉，工艺简单，环保等优点，但用该提取方法所得到的提取物所含成分的种类与含量与乙醇提取物有很大差别，其药效尚待进一步验证。另外还有超声浸提法，加抗氧化剂法等等，各有其自身优点，但他们都有一个共同的缺点，就是金丝桃素的含量低(0.2-0.6％)，绝大部分为无效成分。目前，贯叶连翘提取物的质量控制指标为含金丝桃素类成分不得低于0.3％。这种提取物还达不到中国国家二类新药原料药的质量要求，同时也忽视了贯叶金丝桃素类、黄酮类等有效成分在提取物中的价值。因此，有必要对制备方法进行改进，通过有效的方法富集三大类活性成分，使提取物中总活性成分的含量≥50％。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种贯叶连翘提取物的制备方法，从贯叶连翘或其同属其它植物中提取制备含金丝桃素类、贯叶金丝桃素和黄酮类三大活性成分，且活性成分总含量≥50％的提取物。本专利技术的贯叶连翘提取物的制备方法包括以下步骤(1)取金丝桃属植物贯叶连翘Hypericum perforatum L.或同属其它植物地上有花有叶部分或近顶端部分，用含1-5％复合稳定剂的极性有机溶剂在低于45℃，并不断搅拌下浸提1-3次，每次溶剂用量2-10倍生药量，过滤，合并提取液；所用极性有机溶剂为醇类、酮类、醇水混合物、酮水混合物或酮醇水以任意比例混合物；其中醇类通常为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，酮类通常为丙酮；所说的复合稳定剂为VC或VC的衍生物和VE或VE的衍生物与有机酸的混合体，混合比例为VC或VC的衍生物∶VE或VE的衍生物∶有机酸＝20～200∶20～200∶1(质量比)；其中有机酸通常为柠檬酸、酒石酸或苯甲酸，或它们任意比的混合物；(2)将所得提取液减压浓缩至含生药量0.1-0.5克/毫升，加水至含水量为20-60％，用非极性溶剂萃取1-3次，每次用溶剂量1-6倍体积，合并萃取液；所用非极性溶剂为乙醚、烷烃类、环烷烃类或它们任意比的混合溶剂；其中烷烃类通常为石油醚、正戊烷、正己烷或正庚烷，环烷烃类通常为环戊烷或环己烷；(3)将(2)中萃取后的母液在低于45℃下减压回收(1)中提取时所用溶剂，然后用挥发性酸溶液调节pH为0-4，4-25℃下静置24-72小时，过滤，取沉淀；将所得沉淀经水洗至中性后干燥，得到金丝桃素类和黄酮类成分总含量≥50％的提取物A；所用挥发性酸为盐酸或醋酸，或它们之间以任意比混合；(4)将(2)中萃取后的萃取液用pH≥8.5的碱醇溶液碱化后静置分层，取碱醇层用任意一种酸溶液调pH为0-4；再用非极性溶剂萃取1-3次，每次用溶剂量为1-3倍体积，取非极性溶剂萃取液，在低于45℃下减压回收溶剂，得到贯叶金丝桃素类总含量≥50％的提取物B；所用碱醇溶液为水可溶性碱的10-80％乙醇溶液；所说的水可溶性碱通常为KOH、NaOH、K2CO3、Na2CO3、KHCO3或NaHCO3；所用非极性有机溶剂为乙醚、烷烃类、环烷烃类或它们任意比的混合溶剂；其中烷烃类通常为石油醚、正戊烷、正己烷或正庚烷，环烷烃类通常为环戊烷或环己烷；(5)将(3)和(4)中得到的提取物A和提取物B加入1-5％的复合稳定剂，在极性有机溶剂中混合均匀，再回收溶剂即得活性成分总含量≥50％的贯叶连翘提取物；所用极性有机溶剂为醇类、酮类、醇水混合物、酮水混合物或酮醇水以任意比例混合物；其中醇类通常为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，酮类通常为丙酮；所用复合稳定剂与步骤(1)中相同。本专利技术所得提取物中的金丝桃素和贯叶金丝桃素的含量测定采用HPLC法，金丝桃素类和黄酮类的含量测定采用紫外—可见分光光度法。本专利技术所得提取物中总金丝桃素含量为1-3％wt，总黄酮含量为30-50％wt，贯叶金丝桃素的含量为20-40％wt。本专利技术所得的贯叶连翘提取物具有显著的抗抑郁活性，可作为以贯叶连翘为药材生产的抗抑郁药物或功能食品的原料。本专利技术与已有技术相比，其特点在于(1)所得提取物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种贯叶连翘提取物的制备方法，包括以下步骤： （１） 取金丝桃属植物贯叶连翘或同属其它植物地上有花有叶部分或近顶端部分，用含１－５％复合稳定剂的极性有机溶剂在低于４５℃，并不断搅拌下浸提１－３次，每次溶剂用量２－１０倍生药量，过滤，合并提取液；所用极性有机溶剂为醇类、酮类、醇水混合物、酮水混合物或酮醇水以任意比例混合物；所说的复合稳定剂为Ｖ↓［Ｃ］或Ｖ↓［Ｃ］的衍生物、Ｖ↓［Ｅ］或Ｖ↓［Ｅ］的衍生物与有机酸的混合体，混合比例为２０～２００∶２０～２００∶１质量比； （２） 将所得提取液减压浓缩至含生药量０．１－０．５克／毫升，加水至含水量为２０－６０％，用非极性溶剂萃取１－３次，每次用溶剂量１－６倍体积，合并萃取液；所用非极性溶剂为乙醚、烷烃类或环烷烃类，或它们的任意比混合溶剂； （３） 将（２）中萃取后的母液在低于４５℃下减压回收（１）中提取时所用溶剂，然后用挥发性酸溶液调节ｐＨ为０－４，４－２５℃下静置２４－７２小时，过滤，取沉淀；将所得沉淀经水洗至中性后干燥，得到金丝桃素类和黄酮类成分总含量≥５０％的提取物Ａ；所用挥发性酸为盐酸或醋酸，或它们之间以任意比混合； （４） 将（２）中萃取后的萃取液用ｐＨ≥８．５的碱醇溶液碱化后静置分层，取碱醇层调ｐＨ为０－４；再用非极性溶剂萃取１－３次，每次用溶剂量为１－３倍体积，取非极性溶剂萃取液，在低于４５℃下减压回收溶剂，得到贯叶金丝桃素类总含量≥５０％的提取物Ｂ；所用碱醇溶液为水可溶性碱的１０－８０％乙醇溶液； （５） 将（３）和（４）中得到的提取物Ａ和提取物Ｂ加入１－５％的复合稳定剂，在极性有机溶剂中混合均匀，再回收溶剂即得含贯叶金丝桃素、金丝桃素类和黄酮类三大活性成分总量≥５０％的贯叶连翘提取物；所用极性有机溶剂及复合稳定剂与步骤（１）相同。...

【技术特征摘要】
1.一种贯叶连翘提取物的制备方法，包括以下步骤(1)取金丝桃属植物贯叶连翘或同属其它植物地上有花有叶部分或近顶端部分，用含1-5％复合稳定剂的极性有机溶剂在低于45℃，并不断搅拌下浸提1-3次，每次溶剂用量2-10倍生药量，过滤，合并提取液；所用极性有机溶剂为醇类、酮类、醇水混合物、酮水混合物或酮醇水以任意比例混合物；所说的复合稳定剂为VC或VC的衍生物、VE或VE的衍生物与有机酸的混合体，混合比例为20～200∶20～200∶1质量比；(2)将所得提取液减压浓缩至含生药量0.1-0.5克/毫升，加水至含水量为20-60％，用非极性溶剂萃取1-3次，每次用溶剂量1-6倍体积，合并萃取液；所用非极性溶剂为乙醚、烷烃类或环烷烃类，或它们的任意比混合溶剂；(3)将(2)中萃取后的母液在低于45℃下减压回收(1)中提取时所用溶剂，然后用挥发性酸溶液调节pH为0-4，4-25℃下静置24-72小时，过滤，取沉淀；将所得沉淀经水洗至中性后干燥，得到金丝桃素类和黄酮类成分总含量≥50％的提取物A；所用挥发性酸为盐酸或醋酸，或它们之间以任意比混合；(4)将(2)中萃取后的萃取液用pH≥8.5的碱醇溶液碱化后静置分层，取碱醇层调pH为0-4；再用非极性溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨得坡，王发松，黄亚东，胡海燕，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]