脑小血管病模型及其构建方法技术

本发明专利技术提供了脑小血管病模型及其构建方法，属于分子生物技术领域。本发明专利技术通过基因编辑在HTRA1基因位点引入Q151X杂合子突变和R370X纯合子突变，并通过将其分化为内皮细胞、平滑肌细胞和血管类器官，从而模拟HTRA1突变导致的脑小血管病（CSVD），并进一步研究HTRA1‑CSVD的发病机制，成功建立了HTRA1‑CSVD药物筛选平台，可用于脑小血管病致病机制解析、靶向药物高通量筛选及临床前疗效验证，为突破当前HTRA1相关疾病缺乏特异性治疗手段的困境提供关键技术支撑，对推动神经退行性血管病变的精准医学研究具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物，尤其涉及脑小血管病模型及其构建方法。

技术介绍

1、脑小血管病（cerebral small vessel disease, csvd）对老年人群的认知功能具有显著影响。该疾病的病理特征表现为脑内小动脉、微动脉、毛细血管及微静脉的结构与功能异常。其典型病理改变包括小动脉壁增厚、平滑肌细胞丢失、内膜增生、血管硬化及纤维化，这些变化共同导致血管壁完整性受损，易引发微出血和缺血性损伤。此外，基底膜增厚、内皮功能障碍及血管通透性异常进一步加剧脑缺血和炎症反应，最终导致白质病变、腔隙性梗死、认知障碍及步态异常等临床表现。尽管通过控制高血压、糖尿病等风险因素可在一定程度上延缓疾病进展，但针对csvd的特异性药物治疗仍存在空白。药物开发的核心瓶颈在于缺乏能够精准模拟人类疾病特征的病理模型，这严重限制了对其发病机制的深入解析及有效疗法的发现。

2、近年来研究发现，htra1基因突变是遗传性csvd的常见遗传病因。htra1基因编码的丝氨酸蛋白酶通过降解细胞外基质（如胶原蛋白、纤连蛋白）参与血管稳态调控，其功能异常会导致细胞外基质过度沉积本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种HTRA1基因编辑的人多能干细胞，其特征在于，所述人多能干细胞的HTRA1基因座中包含Q151X杂合突变和R370X纯合突变的基因修饰。

2.权利要求1所述的人多能干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述基因编辑系统还包括辅助质粒pJC025，所述pJC025的序列如SEQ ID NO.26所示。

4.通过权利要求1所述的人多能干细胞诱导分化得到的神经嵴干细胞。

5.通过权利要求4所述的神经嵴干细胞诱导分化得到的血管平滑肌细胞或类器官。

6.权利要求1所述的人多能干...

【技术特征摘要】

1.一种htra1基因编辑的人多能干细胞，其特征在于，所述人多能干细胞的htra1基因座中包含q151x杂合突变和r370x纯合突变的基因修饰。

2.权利要求1所述的人多能干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述基因编辑系统还包括辅助质粒pjc025，所述pjc025的序列如seq id no.26所示。

4.通过权利要求1所述的人多能干细胞诱导分化得到的神经嵴干细胞。

5.通过权利要求4所述的神经嵴干细胞诱导分化得到的血管平滑肌细胞或类器...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凯，田亮亮，王茜，马潇菁，潘子航，刘皎，孙立君，王斯嘉，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：