针对多个乙型肝炎病毒基因靶标的数字PCR测定设计及用于其的不可延伸的阻断剂寡核苷酸制造技术

本发明专利技术提供了涉及用于检测和定量多种乙型肝炎病毒(HBV)基因靶标的新颖数字PCR(dPCR)测定设计(液滴数字或其他系统)的组合物和方法。所述组合物和方法可进一步包括用于减少非特异性扩增子间延伸的不可延伸的阻断剂寡核苷酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开涉及体外病毒诊断领域。在该领域内，本专利技术涉及可能存在于样品中的靶核酸的扩增和检测，并且特别是，包括乙型肝炎病毒(hbv)的序列变异和/或个体突变的靶核酸的特异性扩增和检测，该靶核酸特别是hbv rna(特别是来源于共价闭合环状双链dna(cccdna)的hbv rna诸如hbv前基因组rna(pgrna))以及其他hbv基因靶标，任选地使用至少一种竞争性阻断寡核苷酸来减少非特异性扩增子间延伸。本专利技术进一步提供了用于扩增和检测各种hbv rna形式的方法、反应混合物以及含有寡核苷酸(诸如反转录(rt)引物和竞争性阻断寡核苷酸)的试剂盒。

技术介绍

1、乙型肝炎是一种由hbv引起的肝脏的感染性疾病。注意，hbv可引起急性和/或慢性感染。在最初感染期间，许多人没有症状，而有些人发病迅速(包括呕吐、皮肤发黄、疲倦、尿色深和腹痛)。在出生前后感染的那些患者更容易受慢性乙型肝炎的折磨。大多数患有慢性疾病的那些个体也没有症状，但最终可能会发展为肝硬化和肝癌。这些并发症导致15％至25％的患有慢性疾病的那些人死亡。一般来说，hbv是通过暴露于感染性血液或体液本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通过数字PCR(dPCR)来对样品中的介于两种与六种之间的不同的乙型肝炎病毒(HBV)靶核酸进行检测和定量的方法，所述方法包括，

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述介于两种与六种之间的不同的HBV靶核酸选自由前核心-mRNA 5'末端(非前基因组RNA)、核心、X基因、截短的RNA 3'末端(poly(A)连接)、前核心/核心、全长RNA 3'末端(poly(A)连接)、选定的剪接点、S基因(前剪接位点)、S基因(后剪接位点)和前基因组RNA 5'末端组成的组。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述dPCR测定使用选自表4和6中所列寡核苷...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种通过数字pcr(dpcr)来对样品中的介于两种与六种之间的不同的乙型肝炎病毒(hbv)靶核酸进行检测和定量的方法，所述方法包括，

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述介于两种与六种之间的不同的hbv靶核酸选自由前核心-mrna 5'末端(非前基因组rna)、核心、x基因、截短的rna 3'末端(poly(a)连接)、前核心/核心、全长rna 3'末端(poly(a)连接)、选定的剪接点、s基因(前剪接位点)、s基因(后剪接位点)和前基因组rna 5'末端组成的组。

3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述dpcr测定使用选自表4和6中所列寡核苷酸的对所述hbv靶核酸具有特异性的所述正向和反向引物组以及探针来进行。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中经标记的探针上的所述荧光染料选自由atto-425、fam、hex、德克萨斯红、cy5和cy5.5组成的组。

5.一种通过聚合酶链式反应(pcr)来检测和定量样品中的至少两种不同的乙型肝炎病毒(hbv)靶核酸的方法，所述方法包括，

6.根据权利要求5所述的方法，其中在每个分区中进行的所述pcr测定为数字pcr(dpcr)测定。

7.根据权利要求5至6中任一项所述的方法，其中所述至少两种不同的hbv靶核酸选自由前核心-mrna 5'末端(非前基因组rna)、核心、x基因、截短的rna 3'末端(poly(a)连接)、前核心/核心、全长rna 3'末端(poly(a)连接)、选定的剪接点、s基因(前剪接位点)、s基因(后剪接位点)和前基因组rna 5'末端组成的组。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述dpcr测定使用选自表4和6中所列寡核苷酸的对所述hbv靶核酸具有特异性的所述正向和反向引物组以及探针来进行。

9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法，其中经标记的探针上的所述荧光染料选自由atto-425、fam、...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·T·汉密尔顿，P·J·道森，E·M·斯科特，C·马诺，孙惊涛，W·杨，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：