nor-柯巴基焦磷酸合酶突变体、编码基因、基因工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了nor‑柯巴基焦磷酸合酶突变体、编码基因、基因工程菌及其应用，其突变体为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列251位天冬酰胺突变为赖氨酸或482位甲硫氨酸突变为亮氨酸。本发明专利技术的突变体可用于制备具有较高利用价值的次丹参酮二烯前体nor‑柯巴基焦磷酸。本发明专利技术具有经济效益高、绿色环保、工艺简单、催化效率高等优势；本发明专利技术实现了nor‑柯巴基焦磷酸合酶突变体的异源表达，突破次丹参酮二烯异源合成的瓶颈问题，构建次丹参酮二烯微生物生产底盘细胞，将次丹参酮二烯在酿酒酵母中的产量大大提高，50ml摇瓶发酵产量分别提高至17.4mg/L和16.7mg/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶基因工程及酶工程领域，具体涉及nor-柯巴基焦磷酸合酶突变体、编码基因、基因工程菌及其应用。

技术介绍

1、植物源二萜类化合物是一个巨大的资源库，有待开发利用。鼠尾草酸、丹参酮和雷公藤甲素等abietane型二萜类化合物具有优异的生物活性和广泛的临床应用价值。次丹参酮二烯(miltiradiene)是生物合成这类二萜化合物的重要中间体。建立高效的次丹参酮二烯合成平台对下游产品的合成至关重要。目前，这些二萜化合物的来源依赖化学合成和天然产物提取。然而，化学合成途径步骤复杂且转化率低，天然产物提取则易受原料限制难以大规模生产。合成生物学技术的发展为这些二萜化合物提供了新型生物合成模式，产次丹参酮二烯工程菌株的构建使利用生物发酵大规模制备这些二萜化合物成为可能。

2、nor-柯巴基焦磷酸合酶是次丹参酮二烯生物合成的关键限速酶。天然的nor-柯巴基焦磷酸合酶存在催化效率低、底物专一性差、立体/区域选择性差、稳定性差等问题，严重影响次丹参酮二烯生物及其下游产物合成的产量。因此，提高nor-柯巴基焦磷酸合酶的活性对于确保次丹参酮二烯即其下游本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.nor-柯巴基焦磷酸合酶突变体，其特征是SEQ ID NO.1所示nor-柯巴基焦磷酸合酶的氨基酸序列251位天冬酰胺突变为赖氨酸或482位甲硫氨酸突变为亮氨酸。

2.权利要求1所述nor-柯巴基焦磷酸合酶突变体的编码基因。

3.含权利要求2所述编码基因的重组质粒。

4.含权利要求3所述重组质粒的基因工程菌。

5.权利要求4所述基因工程菌发酵制备次丹参酮二烯及其下游产物的应用。

【技术特征摘要】

1.nor-柯巴基焦磷酸合酶突变体，其特征是seq id no.1所示nor-柯巴基焦磷酸合酶的氨基酸序列251位天冬酰胺突变为赖氨酸或482位甲硫氨酸突变为亮氨酸。

2.权利要求1所述nor-柯巴基焦磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱宏吉，周洪龙，陈瑞琦，乔建军，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：