一种具有淋巴管血管的脉管类器官及其构建方法技术

本发明专利技术属于类器官制备技术领域，具体涉及一种具有淋巴管血管的脉管类器官及其构建方法。本发明专利技术提供的构建方法，首次成功制备得到具有淋巴内皮细胞形成的淋巴管结构。本发明专利技术构建的具有淋巴管血管类器官，其功能性淋巴血管类器官中形成明显的网络状血管结构；可用不同的脱细胞基质或人工合成水凝胶进行培养功能性脉管类器官。本发明专利技术构建的完善的具有淋巴管和血管结构的脉管类器官在探究器官发育、药物筛选、致病机理以及组织再生有非常重要的意义，具有巨大的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于类器官制备，具体涉及一种具有淋巴管血管的脉管类器官及其构建方法。

技术介绍

1、淋巴系统在宿主防御机制中起着至关重要的作用，包括促进免疫细胞成熟、脂质重吸收和间质液平衡。与毛细血管相比，淋巴微毛细血管由不连续的基底膜组成，缺少广泛的周细胞覆盖。此外，淋巴管呈现不规则形状或塌陷的管腔，缺乏红细胞。淋巴管结构通常分为毛细血管（直径10-60µm）或收集淋巴管（直径50-200µm）。同样，血管可以分为毛细血管（4-10µm）或更大的结构，如小动脉和小静脉（10-100µm）。尽管血液和淋巴管系统在功能层面上紧密相连，但两个系统在解剖学上是分开的，以确保细胞的营养供应和组织稳态。然而，由于体内淋巴内皮（lec）样本的稀缺，还需要一个优化的lec分化系统来研究体内lec发育的潜在机制。体外缺乏功能性血管网络是许多生物工程组织的主要缺点之一，也是体内坏死的常见原因。尽管之前的大多数研究都集中在血管系统上，但最近的发现使人们越来越关注淋巴管的作用及其在组织再生中的作用。然而，到目前为止，只有少数研究试图共同设计血液和淋巴微毛细管。因此，需要通过体外自组装本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种具有淋巴管血管的脉管类器官的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述多功能能干细胞iPSC选自人或动物的诱导多能干细胞、胚胎干细胞或成体干细胞。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述悬浮低吸附培养法的具体过程为：用含有10 μM的干细胞mTesR或Essential 8完全培养基重悬于超低吸附孔板中，在37℃、5%CO2条件下培养1-2天。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2中，所述诱导向中胚层分化的培养基为N2B27培养基，并加入3-12...

【技术特征摘要】

1.一种具有淋巴管血管的脉管类器官的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1中，所述多功能能干细胞ipsc选自人或动物的诱导多能干细胞、胚胎干细胞或成体干细胞。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1中，所述悬浮低吸附培养法的具体过程为：用含有10 μm的干细胞mtesr或essential 8完全培养基重悬于超低吸附孔板中，在37℃、5%co2条件下培养1-2天。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s2中，所述诱导向中胚层分化的培养基为n2b27培养基，并加入3-12 µm chir99021，5-30 ng/ml bmp4形成中胚层诱导培养基，每孔沿侧壁缓慢加入 2 ml 中胚层诱导培养基，培养 3 天。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s3中，所述诱导向血管谱系细胞分化的培养基为n2b27培养基，具体过程为：将步骤s2形成的聚集体转入n2b27 培养基中，向培养基中加入10-100 ng/ml vegf165，0.01-2.0 mm丙酮酸、10-100 ng/ml vegfc/vegfd，103-106 u lif，0.5-5.0 μm forskolin培养诱导血管谱系细胞分化，在37℃、5%co2 条件下培养2-3天 。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s4中，所述包胶培养的混合培养基是stempro-34 sfm 完全培养基中，添加10-150 ng/ml vegf165、10-150 ng/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱楚洪，关晓文，刘若云，杨东成，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：