一种用于生产腺苷磷酰硫酸的AMP硫酸化酶突变体及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于生产腺苷磷酰硫酸的AMP硫酸化酶突变体及应用，属于生物工程技术领域。本发明专利技术以AMP为原料，利用AMP硫酸化酶BtaAPSST M2和PcAPSK进行PAPS的生物合成。在10g/L BtaAPSST M2湿菌体和20g/L PcAPSK湿菌体催化下，PAPS的转化率为70.59％。相较于目前能够催化ATP生成APS的ATP硫酸化酶，本发明专利技术的成本更低，转化率相当。其中，BtaAPSST M2的PAPS产量是野生酶的2倍，加快了微生物合成法生产PAPS的工业化进程。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于生产腺苷磷酰硫酸的amp硫酸化酶突变体及应用，属于生物工程。

技术介绍

1、硫酸化化合物广泛存在于胞浆、细胞表面及胞外基质中，在机体细胞发育、分化、免疫、解毒和信号传递等生命活动过程中起着不可替代的作用。3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸(3’-phosphoadenosine-5'-phosphosulfate，paps)是化合物硫酸化过程中最常用的磺酸基团供体。在体内，无机硫酸经atp硫酸化酶被腺苷三磷酸(adenosine triphosphate，atp)激活形成腺苷磷酰硫酸(adenosine phosphosulfate，aps)，aps经aps激酶催化最终形成paps，完成无机硫向有机硫的转化，paps经由多种还原酶催化，形成亚硫酸化合物(sulfite)和含硫化台物(sulfide)，完成多糖类、蛋白类、激素类和黄酮类等化合物的合成和修饰。paps合成的研究无论对于体内硫代谢途径的解析还是体外磺酸化合物的合成应用都有十分重要的意义。

2、目前，paps的合成方法主要有化学法和生物法。然而，化学法合成paps耗能本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种AMP硫酸化酶突变体，其特征在于，所述突变体是通过将氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示的AMP硫酸化酶的第117位的亮氨酸突变为天冬氨酸或组氨酸后得到的；

2.编码权利要求1所述AMP硫酸化酶突变体的基因或携带编码权利要求1所述AMP硫酸化酶突变体的基因的重组载体。

3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体是以pET系列为表达载体；优选地，所述表达载体为pET28a。

4.表达权利要求1所述的AMP硫酸化酶突变体或携带权利要求2所述基因或重组载体的微生物细胞。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞，其特征在于，所述...

【技术特征摘要】

1.一种amp硫酸化酶突变体，其特征在于，所述突变体是通过将氨基酸序列如seq idno.1所示的amp硫酸化酶的第117位的亮氨酸突变为天冬氨酸或组氨酸后得到的；

2.编码权利要求1所述amp硫酸化酶突变体的基因或携带编码权利要求1所述amp硫酸化酶突变体的基因的重组载体。

3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体是以pet系列为表达载体；优选地，所述表达载体为pet28a。

4.表达权利要求1所述的amp硫酸化酶突变体或携带权利要求2所述基因或重组载体的微生物细胞。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞，其特征在于，所述微生物细胞是以细菌或真菌为宿主细胞；优选地，所述微生物细胞是以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌或酵母菌为宿主细胞。

6.一种提高amp硫酸化酶的酶活或者提高amp硫酸化酶对底物amp转化率的方法，其特征在于，所述方法为，将氨基酸序列如seq id no.1所示的amp硫...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴静，顾思敏，李晓敏，齐禾嘉，宋祥廷，宋伟，魏婉清，胡贵鹏，刘佳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：