一种CAR-NK细胞的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种CAR‑NK细胞的培养方法，涉及生物医学工程与细胞治疗技术领域。方案包括：从胎盘组织中提取得到含NK细胞的单个核细胞群体，经去除贴壁细胞和亲和分选获得富含NK细胞的细胞群，进行体外扩增培养后，与携带嵌合抗原受体基因的病毒载体接触，最终获得表达CAR的NK细胞。本发明专利技术的有益效果是：通过多维度调控提升NK细胞扩增效率、病毒转导效率及功能成熟度，所获CAR‑NK细胞在CAR表达率、杀伤率及关键因子分泌方面均显著优于现有方法，解决了表达不稳定、功能弱等问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学工程与细胞治疗，特别涉及一种car-nk细胞的培养方法。

技术介绍

1、嵌合抗原受体修饰的自然杀伤（car-nk）细胞作为近年细胞免疫治疗领域的重要分支，在治疗血液系统恶性肿瘤方面展现出良好的安全性与潜在疗效。相较于car-t细胞，car-nk细胞具有来源广泛、无需hla配型、引发gvhd风险较低等优势，适合构建“现货型”通用免疫细胞产品。目前，部分来源于脐带血、外周血及诱导多能干细胞（ipsc）的car-nk细胞技术已进入临床研究阶段，探索其在急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤等疾病中的应用潜力。car-nk疗法的关键在于对原代nk细胞进行有效的体外扩增和病毒介导的嵌合抗原受体基因导入，获得既表达car分子，又保有天然杀伤功能的细胞群体。为此，研究者尝试从细胞培养体系、转导工艺、病毒类型及细胞预处理流程等多方面优化，以提升构建效率和功能成熟度，然而仍面临多项关键瓶颈。

2、在现有技术中，尽管已开发出多种体外培养策略以扩增原代nk细胞，但这些策略往往存在扩增倍数有限、细胞状态不稳定等问题，特别是在转导前后的细胞活力维持方面本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种CAR-NK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的CAR-NK细胞的培养方法，其特征在于，步骤S1中通过向胎盘组织注入无菌生理盐水进行灌流，结合密度为1.073–1.081g/mL的OptiPrep密度梯度液进行层叠离心分离，以获得单个核细胞群体。

3.根据权利要求1所述的CAR-NK细胞的培养方法，其特征在于，步骤S2中所述对单个核细胞群体进行处理包括，将所述单个核细胞群体接种于无血清培养基中，在静置后，去除贴壁细胞，收集非贴壁细胞并经亲和层析柱分离，获得富含NK细胞的细胞群。

4.根据权利要求1所述的CAR-N...

【技术特征摘要】

1.一种car-nk细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的car-nk细胞的培养方法，其特征在于，步骤s1中通过向胎盘组织注入无菌生理盐水进行灌流，结合密度为1.073–1.081g/ml的optiprep密度梯度液进行层叠离心分离，以获得单个核细胞群体。

3.根据权利要求1所述的car-nk细胞的培养方法，其特征在于，步骤s2中所述对单个核细胞群体进行处理包括，将所述单个核细胞群体接种于无血清培养基中，在静置后，去除贴壁细胞，收集非贴壁细胞并经亲和层析柱分离，获得富含nk细胞的细胞群。

4.根据权利要求1所述的car-nk细胞的培养方法，其特征在于，步骤s3中扩增培养所述富含nk细胞的细胞群时，所用培养基为x-vivo15，并含有以下组分：il-21，thymosin-α1，植物源脂质纳米盘，n-乙酰-l-半胱氨酸。

5.根据权利要求4所述的car-nk细胞的培养方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑景峰，黄健辉，黄付军，张建，吴万宁，于晓锋，陈伟，
申请(专利权)人：广东冠驰干细胞医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：