包含来自脂肪组织干细胞的治疗缺血性肢体疾病的组合物制造技术

本发明专利技术公开了用于治疗缺血性肢体疾病的细胞治疗组合物，更具体地说，本发明专利技术公开了用于治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有来自人脂肪组织的间充质干细胞作为活性成分和蔗糖或者甘露糖作为赋形剂。该组合物诱导了在缺血性肢体病变中封闭血管周围的血管形成，因此对于治疗缺血性疾病是有效的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于治疗缺血性肢体疾病的细胞治疗组合物，具体涉及用于治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有来自脂肪组织的间充质(mesenchymal)干细胞和赋形剂。
技术介绍
缺血性肢体疾病包括由于血管内血栓症、栓塞、血管内发炎、高血压、高血脂和糖尿病综合症引起的动脉和静脉闭塞而导致的外周循环障碍糖尿病足(diabetic foot);如烧伤或者冻疮等外部因素引起的血管损伤导致的症状；以及在烟瘾极大的中年男子中表现为血炎症和血栓的血栓闭塞性血管炎(Buerger' s disease)，其典型例子是闭塞性动脉硬化症、血管闭塞性脉管炎以及类似疾病。 目前治疗所述疾病的方法包括优选治疗引起血栓或者栓塞的疾病，例如心律不齐、心房粘液瘤和红细胞增多症以及使用溶解血栓剂暂时减轻症状或者为了增大腔的直径给药例如右旋糖酐、抗凝血剂、苯基丁氮酮、潘生丁、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂或者前列腺素E1等血管扩张剂和循环改善试剂。 手术疗法包括通过交感神经切除术、硬膜外阻断和交感神经阻断来解除痛苦的方法，减少交感神经过度紧张以诱导改善血管舒张和血液循环效果的方法，使用人造血管诸如Gortex的支路移植外禾斗手术和病灶切除术(lesionectomy)。 但是，上面描述的药物治疗或者手术治疗方法具有的问题在于，它们暂时减轻了缺血性疾病症状或者显示了高度复发的风险。由于这种原因，需要开发能够根本上治疗缺血性疾病的方法。 干细胞指的是不仅具有自我复制而且具有分化成至少两种细胞的能力的细胞，并且可被分成全能干细胞、多功能干细胞(pluripotent stem cells)和多潜能干细胞(multipotent stem cells)。 近来发现脂肪组织是多潜能干细胞的新来源(Cousin等人，BBRC. ，301 :1016，2003 ;Miranville等人，Circulation, 110 :349， 2004 ;Gronthos等人，J. Cell Physiol.，189 :54,2001 ;Seo等人，BBRC. ，328 :258,2005)。也就是说，据报导，通过抽脂术得到的人脂肪组织中包含未分化细胞组并具有分化成脂肪细胞、成骨细胞、成肌细胞和成软骨细胞的能力(Zuk等人，Tissue Eng. ， 7 :211， 2001 ;Rodriguez等人，BBRC. ， 315 :255， 2004)。这禾中脂肪组织具有的优点在于其能够大量提取，其可以通过组织培养大量增殖，并且由于其为自体同源组织，因此不存在免疫排斥反应的风险，因而其可以重复注射。因此，其作为新的干细胞来源受到关注，克服来自骨髓或者脐带血所存在诸如难以收集、成本高以及必须通过组织相容性验证发现合适匹配的缺陷。 而且，近来使用动物模型实验的研究表明，来自脂肪组织的细胞具有能够再生肌肉和剌激神经血管分化的能力。因此，来自脂肪组织的细胞作为新的干细胞来源受到关注。 到目前为止已知的来自脂肪组织的干细胞包括可分化成上皮细胞的来自人脂肪组织的成人干细胞(Brzoska等人，BBRC，330 :142， 2005)，可分化成成骨细胞和脂肪细胞的来自人脂肪组织的成人干细胞(Cao等人，BBRC， 332 :370， 2005)，可分化成神经细胞的来自人脂肪组织的成人干细胞(Safford等人，BBRC，294 :371， 2002)，可分化成脂肪细胞的来自鼠脂肪细胞的干细胞(0gawa等人，BBRC，319 :511， 2004)，可分化成成骨细胞和成软骨细胞的来自鼠脂肪细胞的干细胞(0gawa等人，BBRC，313 :871， 2004)，可分化成软骨细胞的来自人脂肪组织的干细胞(Biomaterials， 25 :3211， 2004)，可分化成神经细胞的来自鼠脂肪细胞的干细胞(Fujimura等人，BBRC，333 :116， 2005)，以及可分化骨细胞、软骨细胞、神经细胞或肌肉细胞的来自脂肪细胞的干细胞(US 6， 777， 231)。 为了治疗缺血性疾病，韩国专利公开号2003-0034177公开了使用其分化已经由G-CSF诱导的造血干细胞治疗缺血性疾病的方法，韩国专利公开号2005-0111593公开了使用具有其中引入了血管蛋白(angiopoietin)基因的间充质干细胞治疗缺血性疾病的方法。但是，现有方法具有的问题在于干细胞被辅助使用，或者含有干细胞的细胞治疗剂的储存不稳定。 因此，本专利技术的专利技术人付出了许多努力来开发使用更稳定的干细胞来治疗缺血性疾病的方法，结果发现，当将赋形剂诸如蔗糖加入到其中的来自脂肪组织的脂肪干细胞引入到缺血性疾病的鼠模型中时，有效地产生了新的血管，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有来自脂肪组织的间充质干细胞作为活性成分，并在冷藏或者冻藏储存时显示很高的稳定性。 为了实现上述目的，本专利技术提供了治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有作为活性成分的来自脂肪组织的间充质干细胞和赋形剂，其中来自脂肪组织的间质细胞的浓度为1 X 105 1 X 108个细胞/mL，并且赋形剂为蔗糖或者甘露糖。 在本专利技术中，用于组合物的基质优选选自下组，该组包括生理盐水、磷酸盐缓冲液(PBS)和Hartman-D⑧。 在本专利技术中，组合物优选另外包括白蛋白或者人血清作为赋形剂。另外，组合物优选另外包括EDTA或者匿S0作为赋形剂。 在本专利技术中，组合物优选另外包括药物学上可接受量的至少一种选自下组的添加剂，该组包括悬浮剂、溶解剂、稳定剂、等渗剂、防腐剂、防吸收剂、表面活性剂、稀释剂、载色剂、PH调节剂、镇痛剂、缓冲剂、含硫还原剂和抗氧化剂。 通过下列详细描述和所附的权利要求书，本专利技术的其他特征和实施方式将是容易想到的。附图说明 图l显示了以100X放大倍数摄取的根据本专利技术的来自人脂肪组织的多潜能干细胞的照片。 图2显示了根据本专利技术的来自人脂肪的多潜能干细胞的免疫性质。 图3显示了根据本专利技术的来自人脂肪组织的多潜能干细胞相对于球形形成能力的稳定性。4 图4显示了根据本专利技术的来自人脂肪组织的间充质干细胞的体外血管形成(angiogenic)會g力。 图5显示了患有诱导的缺血性下肢疾病并注射有本专利技术的来自人脂肪组织间充质干细胞的裸鼠中的肢体切除程度，并显示了使用激光多普勒灌成象观察的裸鼠中的血管形成程度。 图6显示了由激光多普勒灌流比表示的本专利技术的来自人脂肪组织的多潜能干细胞的血管形成能力。具体实施例方式本专利技术涉及治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有浓度为IX 105 IX 108个细胞/mL的来自脂肪组织的间质细胞的和作为赋形剂的蔗糖或者甘露糖。 在本专利技术中，来自脂肪的干细胞通过经抽脂收集的细胞脂肪组织和粘附于培养皿并体外生长的来自脂肪的间充质干细胞得到。 在本专利技术的实施方式中，来自脂肪组织的间质细胞可通过如下步骤得到使用抽脂管或者连接有导管的一次性注射器注入肿胀溶液和含脂肪材料，将得到的材料进行支原体检测和无菌检测，通过质量管理标准从受测材料中选取样品，将所选样品离心成脂肪层和水层，使用胶原酶溶液预处理水层样品，然后在含有10% FBS以及抗坏血酸的DMEM培养基中培养得到的细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有作为活性成分的来自脂肪组织的间充质干细胞和赋形剂，其中来自脂肪组织的间质细胞的浓度为１×１０↑［５］～１×１０↑［８］个细胞／ｍＬ，并且赋形剂为蔗糖或者甘露糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】KR 2007-5-25 10-2007-0050624一种治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其含有作为活性成分的来自脂肪组织的间充质干细胞和赋形剂，其中来自脂肪组织的间质细胞的浓度为1×105～1×108个细胞/mL，并且赋形剂为蔗糖或者甘露糖。2. 根据权利要求1所述的用于治疗缺血性疾病的细胞治疗组合物，其特征在于，用于 组合物的基质选自下组，该组包括生理盐水、磷酸盐缓冲液和Hartman-D⑧。3. 根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩惠晶，李恒永，金孝恩，
申请(专利权)人：RNL生物技术株式会社，罗正灿，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]