PNLDC1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法技术

本发明专利技术公开了Pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，Pnldc1基因与生精障碍或生育功能障碍之间存在关系，Pnldc1基因缺失的雄性小鼠的睾丸的体积比野生型小鼠显著减小，而且其小鼠睾丸中曲细精管排列紊乱，长形精子细胞数量减少，附睾中无精子存在，小鼠精子头部发育异常，9+2微管有缺失，与雌性小鼠交配后，无法得到任何后代，本发明专利技术在受精卵发育早期进行基因编辑，得到的阳性小鼠嵌合率高，传代的概率比囊胚注射ES细胞更大。而且，本发明专利技术可以为雄性不育症的研究提供更好的模型。因此，Pnldc1基因缺失的雄性小鼠具有稳定、生精功能抑制彻底的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法。

技术介绍

1、不孕不育是饱受困扰问题，其中二分之一是因为男性配偶的不育，而精子发生障碍是其重要原因之一。非梗阻型无精症因此，研究并建立男性不育症的动物模型对探究其病因、发病机制及药物研发具有重要作用。

2、近年来，文献报道pnldc1基因的突变会导致男性的少弱畸形精子症，从而引起男性不育。pnldc1基因位于人类染色体6q.25.3，含有20个外显子并在男性生殖器官中有高表达。pnldc1定位与内质网并在进化上高度保守。其蛋白在n端含有caf1家族核酸外切酶结构域和一个c端跨膜结构域。一项体外研究提示哺乳类pnldc1可能具有poly(a)特异性腺嘌呤酶活性。pirna(piwi-interacting rna)是一类生殖细胞中特异表达的非编码小rna，可影响新生dna甲基化、减数分裂、精子变形等过程，对雄性生殖细胞的正常发育分化有重要的意义。此外，体内研究还提示pnldc1参与pirna中间体3’末端修剪过程，并可能影响编码蛋白基因的表达。目前pnldc1基因突变导本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.PNLDC1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；

2.根据权利要求1所述的PNLDC1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述Pnldc1基因敲除F0代阳性小鼠的基因的方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的PNLDC1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述sgRNA靶点设计根据PNLDC1基因组结构和蛋白功能保守区分析，PNLDC1基因存在7个转录产物，将Exon3片段删除后，使整个基因的功能丧失，产生了有表型的突变体，在Exon3两边设计cas9靶点，删除基因组约74bp，实现PNLDC1-201敲除；

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【技术特征摘要】

1.pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；

2.根据权利要求1所述的pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述pnldc1基因敲除f0代阳性小鼠的基因的方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述sgrna靶点设计根据pnldc1基因组结构和蛋白功能保守区分析，pnldc1基因存在7个转录产物，将exon3片段删除后，使整个基因的功能丧失，产生了有表型的突变体，在exon3两边设计cas9靶点，删除基因组约74bp，实现pnldc1-201敲除；

4.根据权利要求1所述的pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述sgrna的序列如下：sgrna(seq id no.1):tactggccaaatgctgatagg/sgrna(seq idno.2):cactgtaaatgttccagg tgg。

5.根据权利要求1所述的pnldc1基因缺失的生精障碍小鼠模型构建方法，其特征在于；所述pn...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡丽丹，陈祥军，刘乐欣，闫永彬，曹中凯，管悦琳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：

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