一种甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法及应用，在谷氨酸棒杆菌内构建基于甘氨酸生物传感器的可响应甘氨酸的基因调控线路，通过在野生型的甘氨酸生物传感器元件序列上进行突变，筛选出对下游基因表达的激活强度提高的甘氨酸生物传感器突变体，从而实现基因的表达调控。本发明专利技术首次在谷氨酸棒杆菌内构建了可以响应甘氨酸的生物传感器基因调控线路，获得甘氨酸生物传感器突变体BS1‑184、BS2‑93、BS2‑94和对应菌株BSR2、BSR3、BSR4，在添加0mM甘氨酸条件下均不开启下游基因表达，在添加80mM甘氨酸条件下对下游基因表达的激活强度比包含野生型甘氨酸生物传感器的菌株BSR1分别提高168.8％、166.2％和194.5％。推动了微生物细胞工厂在甘氨酸及其衍生物生产领域的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于合成生物学领域，具体涉及一种甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法及其应用。

技术介绍

1、生物传感器在代谢工程中具有广泛的应用，从代谢产物的检测到代谢网络的调节，为合成生物学提供了多功能工具。在动态控制系统中，生物传感器必须作为负责感知细胞内代谢物浓度并将此信息转化为特定信号输出的基本元件。生物传感器和动态调控系统已成功地应用于途径的动态调节，底物利用率的提高，关键酶的筛选等方面。

2、大多数生物传感器是基于核糖开关、转录因子(tf)和荧光共振能量转移(fret)设计的。核糖开关是位于mrna的5'非编码区域的调控rna片段。一个核糖开关由一个或两个适体结构域组成，用于结合小分子作为控制信号；随后是一个表达平台介导构象变化，从而影响转录/翻译的起始、终止或响应信号的替代剪接。

3、生物传感器作为监测和调控细胞内代谢物水平的关键工具，对于优化微生物细胞工厂的生产性能至关重要。然而，当前现状是，大多数生物传感器存在与宿主菌的适配性低以及表达调控效能欠佳等问题。

4、在与宿主菌适配方面，不同的微生物宿主菌具有独本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，还包括对所述基因调控线路的测试步骤：

3.根据权利要求1所述甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，所述pEC-XK99E核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示，所述引物BSTG-F-1的核苷酸序列如SEQ IDNO.9所示，所述引物BSTG-F-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述质粒pUC18-BSTG的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，所述M1-37启动子的核苷酸序列如SEQ...

【技术特征摘要】

1.一种甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，还包括对所述基因调控线路的测试步骤：

3.根据权利要求1所述甘氨酸生物传感器基因调控线路的构建方法，其特征在于，所述pec-xk99e核苷酸序列如seq id no.22所示，所述引物bstg-f-1的核苷酸序列如seq idno.9所示，所述引物bstg-f-2的核苷酸序列如seq id no.10所示；所述质粒puc18-bstg的核苷酸序列如seq id no.21所示，所述m1-37启动子的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述teta基因片段的核苷酸序列如seq id no.6所示，所述绿色荧光蛋白的核苷酸序列如seqid no.8所示，所述引物m137-1的核苷酸序列如seq id no.11所示，所述引物m137-2的核苷酸序列如seq id no.12所示，所述引物bstg-teta-1的核苷酸序列如seq id no.17所示，所述引物bstg-teta-2的核苷酸序列如seq i...

【专利技术属性】
技术研发人员：王智文，高明欣，薄泰东，陈涛，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：