一种鼠源单链抗体的重组融合蛋白、DNA分子及建库方法技术

本发明专利技术公开一种鼠源单链抗体的重组融合蛋白、DNA分子及建库方法，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白是由鼠源单链抗体与噬菌体Piii蛋白和荧光素酶连接而成的重组融合蛋白，其中，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，本发明专利技术将荧光素酶与鼠源单链抗体偶联，所述nanoluc的分子量小，故减小了重组融合蛋白的大小，故增大了电转效率和文库容量，且保留了噬菌体中的基因III融合蛋白，也即保留了表达于细菌表面的能力，能够进行多轮筛选以有效富集阳性克隆，这样获得的文库容量容量大、建立的单链抗体TG1文库在1x10<supgt;9</supgt;cfu/mL以上，且具有灵敏度高，高信噪比等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及融合蛋白的，特别涉及一种鼠源单链抗体的重组融合蛋白、dna分子及建库方法。

技术介绍

1、目前绝大部分噬菌体展示文库采用的技术方法是在单链抗体序列后偶联标签蛋白(如myc、flag标签等)。在后续的筛选及检测中，运用hrp偶联的标签蛋白抗体识别结合特定配体的单链抗体。其缺点是需要大量的孵育和洗涤步骤，容易引入假阳性及假阴性。

2、在噬菌体展示文库中一般会添加报告系统，最敏感的信号放大报告系统是酶。但是碱性磷酸酶(140kd)、β-半乳糖苷酶(115kd)、辣根过氧化物酶(44kd)和萤光素酶(62kd)和海肾萤光素酶(34kd)等分子量都较大，大大增加了单链抗体-酶融合蛋白的大小，进而降低了电转效率和文库容量。

3、一些文献中，比如michael tesar等人将nanoluc克隆进噬菌体展示载体中，取代基因iii融合蛋白。将连接产物转化至化学感受态大肠杆菌top10细胞中，用细菌培养上清液筛选能结合特定配体的单链抗体。其缺点是nanoluc取代基因iii融合蛋白后，使得单链抗体丧失了表达于细菌表面的能力，并且不能进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鼠源单链抗体的重组融合蛋白，其特征在于，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白由鼠源单链抗体与噬菌体Piii蛋白和荧光素酶连接而成，其中，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

2.如权利要求1所述的鼠源单链抗体的重组融合蛋白，其特征在于，所述鼠源单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

3.如权利要求1所述的鼠源单链抗体的重组融合蛋白，其特征在于，所述鼠源单链抗体包括轻链和重链：

4.一种DNA分子，其特征在于，用于编码如权利要求1～4所述的鼠源单链抗体的重组融合蛋白，所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ I...

【技术特征摘要】

1.一种鼠源单链抗体的重组融合蛋白，其特征在于，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白由鼠源单链抗体与噬菌体piii蛋白和荧光素酶连接而成，其中，所述鼠源单链抗体的重组融合蛋白的氨基酸序列如seq id no:5所示。

2.如权利要求1所述的鼠源单链抗体的重组融合蛋白，其特征在于，所述鼠源单链抗体的氨基酸序列如seq id no:6所示。

3.如权利要求1所述的鼠源单链抗体的重组融合蛋白，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑沛林，白晓苏，
申请(专利权)人：深圳市龙华区人民医院，
类型：发明
国别省市：