一种NADP型葡萄糖脱氢酶在检测NAD激酶活性中的应用及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种NADP型葡萄糖脱氢酶在检测NAD激酶活性中的应用及检测方法，属于酶活性检测技术领域。本发明专利技术提供了一种NADP型葡萄糖脱氢酶在检测NAD激酶活性中的应用，所述NADP型葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术利用重组表达方式获得的NADP型葡萄糖脱氢酶与NADP<supgt;+</supgt;反应速率较高，而与NAD<supgt;+</supgt;几乎不反应，通过与NAD激酶进行酶偶联反应，根据NADPH的生成速率计算得到NAD激酶的活性。本发明专利技术检测结果表明，所述葡萄糖脱氢酶可用于NAD激酶活性的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶活性检测，具体涉及一种nadp型葡萄糖脱氢酶在检测nad激酶活性中的应用及检测方法。

技术介绍

1、nad激酶(nadk)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前发现的生物体内唯一能够催化nad+磷酸化生成nadp+的酶，可催化nad(h)以atp或无机多聚磷酸[poly(p)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成nadp(h)。因此，nad激酶在合成nadp(h)以及调节nad(h)与nadp(h)的平衡上具有重要作用。

2、目前，通用的nadk活性检测试剂盒检测原理是利用nadp+可被6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为nadph，nadph在340nm处有特征吸收峰，通过在340nm下测定nadph增加速度(吸光值的变化)可反映出nadk活性的大小。由于大多数葡萄糖脱氢酶辅酶特异性比较低，不仅与nadp+反应，还会与nad+反应，因此，在nad激酶活性检测时，大多数葡萄糖脱氢酶无法反映nad激酶活性。

技术实现思路

1、鉴于此，本专利技术提供了一种nadp型葡萄糖脱氢酶在检测na本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种NADP型葡萄糖脱氢酶在检测NAD激酶活性中的应用，所述NADP型葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶是通过重组菌株表达制备得到；

3.一种检测NAD激酶活性的试剂盒，包括NADP型葡萄糖脱氢酶和底物；

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述底物包括三磷酸腺苷、NAD+和葡萄糖。

5.一种检测NAD激酶的酶活的方法，其特征在于，将权利要求4所述试剂盒中NADP型葡萄糖脱氢酶、底物和待测NAD激酶样本混合反应，根据混合反应期间NADPH的生成速率得到N...

【技术特征摘要】

1.一种nadp型葡萄糖脱氢酶在检测nad激酶活性中的应用，所述nadp型葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶是通过重组菌株表达制备得到；

3.一种检测nad激酶活性的试剂盒，包括nadp型葡萄糖脱氢酶和底物；

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述底物包括三磷酸腺苷、nad+和葡萄糖。

5.一种检测nad激酶的酶活的方法，其特征在于，将权利要求4所述试剂盒中nadp型葡萄糖脱氢酶、底物和待测nad激酶样本混合反应，根据混合反应期间nadph的生成速率得到nad激酶的酶活。

6.根据权利要求5所方法，其特征在于，所述混合反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，赵旭，宋清华，孙瑜，
申请(专利权)人：深圳津合生物有限公司，
类型：发明
国别省市：