Ｃ５抗原及其用途制造技术

本发明专利技术涉及补体抑制剂在治疗眼部病症中的用途，和补体抑制剂在制备用于治疗眼部病症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】C5抗原及其用途
技术介绍
黄斑变性是主要存在于老年成人中的医学病症，其中眼衬里的中心(称 作视网膜斑点区)遭受变薄、萎缩并在一些情况下出血。这会导致中央4见 觉丧失，包括不能看到细微的细节、不能阅读或不能识别脸部。对新脉络 膜血管形成的病理学了解较少，但是认为下述因素是重要，例如炎症、缺 血和生血管因子的局部生产。已经确定补体系统蛋白质的基因与人发生黄斑变性的风险密切相关。 补体系统是先天免疫抵抗微生物感染的关键性组件，并且包含一组通常以 失活状态存在于血清中的蛋白质。这些蛋白质以经典通路、凝集素通路和 旁路通路这三种活化通路组织在一起。微生物表面上的分子能够活化这些 通路，导致形成称作C3-转化酶的蛋白酶复合物。经典通路是钩/镁依赖性 的级联，其通常通过抗原-抗体复合物的形成被活化。经典通路也可以通过 与配体复合的C-反应性蛋白质的结合和通过许多病原体(包括革兰氏阴性 细菌)，以不依赖于抗体的方式被活化。旁路通路是镁依赖性的级联，其通 过某些易感表面(例如酵母和细菌的细胞壁多糖，和某些生物多聚体材料) 上C3的; 冗积和活化4皮活4匕。旁路通路参与经典通路和凝集素通路活性的增加。补体通路的活化产 生补体蛋白质例如C3a、 C4a和C5a过敏毒素和C5b-9膜攻击复合物(MAC) 的具有生物活性的片段，所述片段介导涉及以下的炎性应答白细胞趋化 性、巨噬细胞，嗜中性粒细胞，血小板，肥大细胞和内皮细胞的活化、提 高的血管渗透性、细胞溶解和组织损伤。补体组件C5是补体级联中凝集素通路、经典通路和旁路通路共有的 最终通路的主要组件。旁路通路和经典通路C5转化酶对C5的切割产生C5b和C5a片段。C5a和C5b片段均为促炎症反应分子。C5a是强效的过 敏毒素。C5a与C5a受体(C5aR)结合并刺激促炎症反应细胞因子例如 TNF-a、 IL-ip、 IL-6和IL-8从人白细胞中合成和释放。C5b发挥C5b-9 (C5b、 C6、 C7、 C8和C9)装配的成核位点的作用，所述C5b-9也已知 为终端补体复合物或穿透细胞膜形成孔的膜攻击复合物(MAC)，其在亚裂 解(sublytic)浓度下可有助于促炎症反应细胞活化，但是在裂解(lytic)浓度下 导致细胞死亡。还原C5b-9 (MAC)的形成和C5a的产生可能是抑制促成 AMD的炎症应答所需要的。抑制由旁路通路和经典通路的C5转化酶催化 的C5切割可能对AMD的治疗是至关重要的。尽管对于治疗与经典或旁路补体通路(尤其是AMD)相关的疾病和 病症存在治疗选择，但是仍然需要发现导致有效和充分耐受的治疗的特异 靶标。专利技术概述本专利技术涉及C5蛋白质(包括选自SEQ ID 1-6的序列)、其片段以及 制备或使用所述蛋白质的方法。本专利技术还涉及包含C5多核苷酸和多肽的 载体和重组宿主细胞。本专利技术的另一方面提供了用于鉴定调控C5补体组 件活性的测试试剂的方法，和用于筌定C5抗原的结合配偶体的方法。本 专利技术的分离的C5蛋白质的有用性基于C5特异表位的发现，所述表位涉及 与补体活性失调特别是黄斑变性相关的生物活性。本专利技术提供了 C5蛋白质或其片段作为免疫原而产生结合分子从而预 防、治疗和/或延迟涉及补体通路活性失调的疾病或病症的用途，所述结合 分子与选自SEQ ID 1-6的至少一个C5表位结合。在其他方面中，本专利技术提供了抑制旁路补体通路至少一个组件的结合 分子，并且包括制备或使用所述结合分子用于预防、治疗和/或延迟眼部疾 病或病症例力口 AMD的方法。在某些其他方面中，本专利技术提供了治疗或预防眼部疾病或病症、或延 迟其t艮的方法，所述方法包括施用有效量的抗体，所述抗体与一个或多 个C5表位特异结合，从而抑制需要这类治疗的受试者补体通路系统中的在本专利技术的另 一方面中，提供了治疗性或预防性治疗方法中4吏用的药 物组合物，所述组合物包含补体C5功能的蛋白质抑制剂，C5b与C6结合 的蛋白质抑制剂或其可药用盐，以及一种或多种可药用稀释剂或运载体。本专利技术还提供了能够抑制旁路补体通路的结合分子在制备下述药物中 的用途，所述药物用于治疗眼部疾病或病症，或用于延迟它们的发展，其 中蛋白质能够抑制C5蛋白质功能或MAC复合体的生产。本专利技术还提供了如下在样品中鉴定C5表位或编码C5表位的核酸的方 法将样品与特异结合表位或编码这类多肽的核酸的结合分子(例如抗体) 接触，并如果存在则检测复合体形成。还提供了如下鉴定调控C5蛋白质 活性的化合物或结合分子的方法将C5表位与这样的化合物接触，并检 测C5蛋白质活性是否被修饰。还在另 一方面中，本专利技术提供了检测受试者中补体通路失调相关病症 的存在或诱因的方法，其包括提供来自受试者的样品和测量受试者样品中 C5蛋白质量的步骤。然后将受试者样品中具体蛋白质的量或抑制与对照样 品中该蛋白质的量或抑制进行比较。对照样品优选地取自匹配的个体，即 年龄、性别或其他一般条件类似，但是不怀疑患有补体通路失调相关病症 的个体。或者，对照样品可以在受试者不被怀疑患有补体通路失调相关病 症时取自该受试者。在一些方面中，^使用本文所述的结合分子(特别是抗 体)检测目的化合物或结合分子。在本专利技术的另一方面中，提供了用于结合血清样品中C5蛋白质的筛 选方法，所述方法包括步骤允许样品中的抗体与已知量本专利技术抗体(抗 -C5)或其功能等价变体或片段之间竟争性结合，并测量已知抗体的量。在另 一方面中，本专利技术涉及用于检测补体通路失调相关病症的诊断试 剂盒，其在合适的包装内包含本专利技术的化合物或结合分子和运载体。试剂 盒优选地含有使用抗体检测C5表位存在的说明书。优选载体是可药用的。描述和优选的实施方案在本文中使用时，化合物或本专利技术的化合物，，应当表示蛋白质(包7括肽)、寡核苦酸、肽模拟物、同源物、类似物及其经修饰或衍生的形式。本专利技术的化合物优选包括选自SEQ ID No 2、 4和6的核餅列、其片段 和4汙生物。本专利技术还包括突变体或变体序列，其任何威基可与相应的SEQ ID No 2、 4和6不同但是仍然编码蛋白质，优选编码选自SEQ ID No 1、 3 和5的抗原性蛋白质。结合分子，，应当表示抗体、有机分子、蛋白质(包括肽)、寡核苷酸、 肽模拟物、同源物、类似物及其经修饰或衍生的形式，其与本专利技术的化合 物结合，优选与选自SEQ ID No 1-6的化合物结合。子，所述分子包含与本文公开的核酸或蛋白质基本同源的区域，在多个实 施方案中，在相同尺寸的核酸或M酸序列上或者与比对序列比较时至少 具有约70%、 80%或95%的同一性(优选的同一性为80-95%)，其中比 对通过本领域已知的计算机同源性程序完成，或者所述分子的编码核酸能 够在严格、中度严格或低严格度条件下与编码前述蛋白质的序列的互补体 杂交(Ausubel等，1987 )。本专利技术提供了 C5蛋白质的抗原性表位，与线性或非线性表位特异结 合的结合分子，制备和使用这类抗原性表位和结合分子的方法。本专利技术首 次描述了具有选自SEQ ID No 1-6的序列的C5表位，其可以被调控用于 预防、治疗或减轻补体通路失调相关的病症，优选眼部疾病和病症。可以通过本专利技术治疗或预防的某些眼部疾病和病症包括至少一部分眼 的炎症和/或新血管生产。可以本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的多核苷酸，其与选自ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２、４和６的核酸序列具有至少９５％的核酸序列同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-3-22 60/896,4081.分离的多核苷酸，其与选自SEQ ID No.2、4和6的核酸序列具有至少95％的核酸序列同一性。2. 分离的多核普酸，其包含选自SEQIDNo. 2、 4和6的核酸序列。3. 载体，其包含与控制序列有效连接的权利要求2的多核苷酸。4. 宿主细胞，其包含权利要求3的载体。5. 分离的多肽，其与选自SEQIDNo 1、 3和5的M酸序列具有至 少95%的氨基酸同一性。6. 分离的多肽，其包含选自SEQIDNol、 3和5的氨基紗列。7. 用于产生C5蛋白质的方法，所述方法包括在适合表达所述多肽的 条件下培养权利要求4的宿主细胞，并从细胞培养物中回收所述多肽。8. 权利要求7的方法，其中所述C5蛋白质包含选自SEQIDNol、 3 和5的表位。9. 分离的C5结合分子，其包含与C5表位特异结合的抗体的抗原结 合部分，所述C5表位在选自SEQ ID No 1、 3和5的氨基酸内或与之重叠。10. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分与非人灵长动 物的C5抗原交叉反应。11. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分与啮齿动物物 种的C5抗原交叉反应。12. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分与线性表位结合。13. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分与非线性表位 结合。14. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分以等于或小于 0.1 nM的KD与人C5抗原结合。15. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分以等于或小于 0.3 nM的Ku与非人灵长动物的C5抗原结合。16. 权利要求9的C5结合分子，其中其抗原结合部分以等于或小于(0.5 nM的KD与小鼠C5抗原结合。17. 前述任一项权利要求的C5结合分子，其中所述抗原结合部分是人 抗体的抗原结合部分。18. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗体是人源化的抗体。19. 前述任一项权利要求的C5结合分子，其中所述抗原结合部分是单 克隆抗体的抗原结合部分。20. 权利要求9的C5结合分子，其中所述抗原结合部分是多克隆抗体 的抗原结合部分。21. 权利要求9的C5结合分子，其中所述C5结合分子是嵌合抗体。22. 权利要求9的C5结合分子，其中所述C5结合分子包含抗体的 Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段或Fv片段。23. 权利要求9的C5结合分子，其中所述C5结合分子包含单链Fv。24. 权利要求9的C5结合分子，其中所述C5结合分子包含双抗体。25. 前述任一项权利要求的C5结合分子，其中所述抗原结合部分来自 以下同种型之一的抗体IgGl、 Ig...

【专利技术属性】
技术研发人员：BC吉尔德，MT基廷，M米利克，D米哈伊洛夫，M罗古斯卡，I斯普劳斯基，K赵，
申请(专利权)人：诺瓦提斯公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]