【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体地说，涉及一种利用cas12蛋白切割非自然序列来检测靶标核酸的方法以及试剂盒。
技术介绍
0、技术背景
1、crispr(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)基因编辑技术因其突出的可编辑性，且操作步骤的简单，在各个领域中被广泛使用。其中，crispr/cas编辑体系中cas蛋白的研究给核酸诊断领域带来了突破性的进展，被认为是下一代核酸检测的工具。crispr class 2cas蛋白的反式切割活性是蛋白诊断技术的基础，所述crispr class 2cas蛋白由cas12和cas13两个家族组成，所述反式切割活性是指非特性切割核酸序列。
2、该技术的原理如下：在crispr rna(crrna)的指导下，cas蛋白能特异性识别、结合且切割靶标核酸；一旦cas蛋白识别到其靶标序列，其反式切割活性就被立即激活，即能非特异性地切割其他邻近的核酸序列。根据cas蛋白的该特性，所述邻近核酸序列通常被设计为一端带有荧光基团...
【技术保护点】
1.一种Cas12蛋白用于制备反式切割非自然序列从而检测靶标核酸的试剂的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述非自然序列包括以下中的任意一项或多项：
3.根据权利要求1或者2所述的用途，其特征在于，所述非自然序列同时含有脱氧核苷酸和核糖核苷酸。
4.根据权利要求1-3之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列的脱氧核苷酸和核糖核苷酸为每间隔一项交替排列，即脱氧核苷酸之后为核糖核苷酸，或核糖核苷酸之后为脱氧核苷酸。
5.根据权利要求1-4之一所述的用途，其特征在于，Cas12蛋白利用其RNase活性反式切割
...【技术特征摘要】
1.一种cas12蛋白用于制备反式切割非自然序列从而检测靶标核酸的试剂的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述非自然序列包括以下中的任意一项或多项：
3.根据权利要求1或者2所述的用途，其特征在于，所述非自然序列同时含有脱氧核苷酸和核糖核苷酸。
4.根据权利要求1-3之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列的脱氧核苷酸和核糖核苷酸为每间隔一项交替排列，即脱氧核苷酸之后为核糖核苷酸，或核糖核苷酸之后为脱氧核苷酸。
5.根据权利要求1-4之一所述的用途，其特征在于，cas12蛋白利用其rnase活性反式切割非自然序列。
6.根据权利要求1-5之一所述的用途，所述的cas12蛋白包括cas12a蛋白或者cas12b蛋白。
7.根据权利要求1-6之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列由构成rna的核苷酸和构成dna的核苷酸组成，所述构成rna的核苷酸为尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和鸟嘌呤核糖核苷酸中的任意一种或多种，所述构成dna的核苷酸为胸腺嘧啶脱氧核苷酸、腺嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸中的任意一种或多种。
8.如权利要求1-7之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列按核糖核苷酸-脱氧核苷酸或脱氧核苷酸-核糖核苷酸依次排列，所述核糖核苷酸为尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和鸟嘌呤核糖核苷酸中的任意一种或多种，所述脱氧核苷酸为胸腺嘧啶脱氧核苷酸、腺嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸中的任意一种或多种。
9.如权利要求1-8之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列包含ruaruarua、aruaruaru、rururarururu、trutrutru、araaraara、crccrccrc和grggrggrg中的任意一种或多种，所述ru为尿嘧啶核糖核苷酸，所述a为腺嘌呤脱氧核苷酸，所述t为胸腺嘧啶脱氧核苷酸，所述ra为腺嘌呤核糖核苷酸，所述c为胞嘧啶脱氧核苷酸，所述rc为胞嘧啶核糖核苷酸，所述g为鸟嘌呤脱氧核苷酸，所述rg为鸟嘌呤核糖核苷酸。
10.如权利要求1-9之一所述的用途，其特征在于，所述非自然序列包含ruaruarua、aruaruaru和trutrutru中的任意一种或多种。
11.如权利要求1-10之一所述的用途，其中，所述的试剂中包括让靶核酸能够扩增的必要试剂。
12.如权利要求1-10之一所述的用途，其中，所述的试剂中包括cas12蛋白以及非自然序列。
13.如权利要求1所述的用途，其中，所述的非自然序列包括不能在自然界漫长的进化过程中产生或产生了不能稳定遗传的核酸序列。
14.如权利要求1所述的用途，所述的靶核酸存在于样本中。
15.如权利要求1所述的用途，所述的样本为唾液、血液、尿液、鼻腔分泌物。
16.如权利要求1所述的用途，所述的靶核酸包括dna或者rna。
17.一种非自然序列用于制备检测靶标核酸的试剂的用途，其特征在于，所述非自然序列包括以下中的任意一项或多项：
18.如权利要求17所述的用途，其中，所述试剂还包括cas12蛋白。
19.如权利要求17所述的用途，其特征在于，所述非自然序列同时含有脱氧核苷酸和核糖核苷酸。
20.一种探针，其特征在于，所述探针包含非自然序列，所述非自然序列包括以下中的任意一项或多项：
21.如权利要求20所述的探针，其特征在于，所述探针由构成rna的核苷酸和构成dna的核苷酸组成，所述构成rna的核苷酸为尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和鸟嘌呤核糖核苷酸中的任意一种或多种，所述构成dna的核苷酸为胸腺嘧啶脱氧核苷酸、腺嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸中的任意一种或多种。
22.如权利要求20所述的探针，其特征在于，所述探针按核糖核苷酸-脱氧核苷酸或脱氧核苷酸-核糖核苷酸依次排列，所述核糖核苷酸为尿嘧啶核糖核苷酸、腺嘌呤核糖核苷酸、胞嘧啶核糖核苷酸和鸟嘌呤核糖核苷酸中的任意一种或多种，所述脱氧核苷酸为胸腺嘧啶脱氧核苷酸、腺嘌呤脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核苷酸和鸟嘌呤脱氧核苷酸中的任意一种或多种。
23.如权利要求20所述的探针，其特征在于，所述探针序列包含ruaruarua、aruaruaru、rururarururu、trutrutru、araaraara、crccrccrc和grggrggrg中的任意一种或多种，所述ru为尿嘧啶核糖核苷酸，所述a为腺嘌呤脱氧核苷酸，所述t为胸腺嘧啶脱氧核苷酸，所述ra为腺嘌呤核糖核苷酸，所述c为胞嘧啶脱氧核苷酸，所述rc为胞嘧啶核糖核苷酸，所述g为鸟嘌呤脱氧核苷酸，所述rg为鸟嘌呤核糖核苷酸。
24.如权利要求20所述的探针，其特征在于，所述探针序列包含ruaruarua、aruaruaru和trutrutru中的任意一种或多种。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘鑫，伊多伦因·A·伊维，姚舒怀，基思·帕迪，阿里尔·科尔萨诺，
申请(专利权)人：奥仁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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