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用作小鼠胚胎测定的替代物的人多能细胞中的双遗传报告子制造技术

技术编号:45945276 阅读:11 留言:0更新日期:2025-07-25 18:12
用于评估细胞培养基和装置的细胞毒性的系统和方法。这样的系统和方法包括经遗传修饰的干细胞,所述经遗传修饰的干细胞已被修饰为当在所述经遗传修饰的干细胞中激活与多能性和/或滋养外胚层发育相关的基因时表达报告子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍

1、小鼠胚胎测定法(mea)是用于评估体外受精(ivf)工业中生产的试剂和实验室器具的品质的惯用生物测定法。在该测定法中,在测试品(例如,暴露于测试装置的测试培养基或对照培养基)的存在下,将单细胞或二细胞小鼠胚胎培养直至胚泡期。评估胚泡形态,并且如果经过相对于对照条件下的胚泡百分比标准化,至少80%的胚胎满足健康胚泡的形态标准,则该测试品被评分为通过。除了被ivf培养基和装置的制造商使用外,mea还被各个ivf诊所用于满足认证要求,以证明胚胎学家在胚胎处理方面的熟练程度,并且mea可用于培训入门级胚胎学家。

2、mea的一个问题是结果高度依赖于所使用的确切程序。例如,研究表明,从单细胞胚胎开始比从二细胞期开始对扰动更敏感。mea中常用的胚胎品系cba/b6杂交胚胎比其他品系敏感性更低,从而导致结果的变化。其他因素,例如培养基中对毒素有“螯合”作用的蛋白质(如白蛋白)的存在或不存在,也可能掩盖对潜在污染物的检测。此外,mea结果是基于形态学评分的,这是主观的。

3、mea的另一个问题是它使用小鼠胚胎,这对于培养中的人类胚胎本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于评估细胞培养基和装置的细胞毒性的方法,所述方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述与滋养外胚层发育相关的基因选自包括CGA和CGB的组。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法,其中所述第一报告子包含生物发光报告子。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一经遗传修饰的干细胞群包含诱导多能干细胞,所述诱导多能干细胞已被修饰为当在所述经遗传修饰的干细胞群中激活与滋养外胚层发育相关的基因时表达第一报告子。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一目标培养基包含被配置为支持滋养外胚层分化的培养基。<...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种用于评估细胞培养基和装置的细胞毒性的方法,所述方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述与滋养外胚层发育相关的基因选自包括cga和cgb的组。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法,其中所述第一报告子包含生物发光报告子。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一经遗传修饰的干细胞群包含诱导多能干细胞,所述诱导多能干细胞已被修饰为当在所述经遗传修饰的干细胞群中激活与滋养外胚层发育相关的基因时表达第一报告子。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一目标培养基包含被配置为支持滋养外胚层分化的培养基。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一目标培养基包含已暴露于测试装置的对照培养基。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一报告子被分泌到所述第一目标培养基中。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一目标培养基包含含有bmp-4、a83-01和/或pd173074的基础培养基。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述第一目标培养基包含毛喉素。

10.根据权利要求9所述的方法,其中将所述第一目标培养基暴露于所述第一经遗传修饰的干细胞群,持续约48小时。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法,所述方法还包括:

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述与多能性相关的基因选自包括sox2、nanog和pouf1的组。

13.根据权利要求11或12中任一项所述的方法,其中所述第二报告子包含生物发光报告子。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法,其中所述第二经遗传修饰的干细胞群包含诱导多能干细胞,所述诱导多能干细胞已被修饰为当在所述第二经遗传修饰的干细胞群中激活与多能性相关的基因时表达第二报告子。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法,其中所述第二目标培养基包含被配置为支持多能性的培养基。

16.根据权利要求11至15中任一项所述的方法,其中所述第二目标培养基包含已暴露于测试装置的对照培养基。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法,所述方法还包括:

18.用于测试细胞培养基的系统,所述系统包含:

19.根据权利要求18所述的系统,其中所述与滋养外胚层发育相关的基因选自包括cga和cgb的组。

20.根据权利要求18或19中任一项所述的系统,其中所述第一报告子包含生物发光报告子。

21.根据权利要求18至20中任一项所述的系统,其中所述第一经遗传修饰的干细胞群包含诱导多能干细胞,所述诱导多能干细胞已被修饰为当激活与滋养外胚层发育相关的基因时表达第一报告子。

22.根据权利要求18至21中任一项所述的系统,其包含:

23.根据权利要求22所述的系统,其中所述第一目标培养基包含已暴露于测试装置的对照培养基。

24.根据权利要求22或23中任一项所述的系统,其中所述第一报告子由所述干细胞分泌。

...

【专利技术属性】
技术研发人员:C·T·丹恩B·M·麦克斯韦恩S·马伦K·谢尔顿
申请(专利权)人:徕璞健康
类型:发明
国别省市:

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