一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒和提取方法技术

本发明专利技术属于核酸提取技术领域，具体涉及一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒和提取方法，所用试剂由裂解液、洗涤液I、洗涤液II以及洗脱液组成，所述提取方法包括以下步骤：将生物样本加入裂解液中，等待进行裂解反应；从洗涤液II中获取磁珠，将磁珠释放进入裂解液，充分混匀并进行裂解反应，通过磁珠吸附释放出来的核酸；将吸附有核酸的磁珠依次经过洗涤液I、洗涤液II洗涤，除去多余的胍盐等；最后经洗脱液进行洗脱，获得高浓度的核酸。本发明专利技术中上样量最大体积可为2mL，且在裂解释放核酸的过程中，不需要蛋白酶K，操作简单、方便、安全。本发明专利技术的核酸提取试剂盒搭配磁珠法全自动核酸提取仪使用，可满足大批量样本的提取要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于核酸提取，具体是涉及到一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒和提取方法。

技术介绍

1、核酸提取技术有很多种，包括sds碱裂解法、酚-氯仿萃取法、单相裂解法、柱式纯化法以及磁珠法。随着分子诊断的发展，病原微生物核酸提取后可通过荧光pcr等方法鉴定作为临床参考，也使得对核酸提取的技术要求不断提高。磁珠法核酸提取技术因自动化程度高，提取速度快，所获核酸浓度高和纯度好，已成为主流方法。

2、目前基于磁棒法的磁珠法核酸自动提取技术的商品化试剂盒，其样品添加量基本为200μl或400μl，所提取获得的核酸浓度与质量足以满足后续的分子生物学实验。然而，现目前在动物疾病病原检测方面对检测灵敏度的要求越来越高，在优化荧光pcr反应体系的同时，也对核酸提取的浓度提出了进一步的要求。

技术实现思路

1、本专利技术要解决的技术问题是提供一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒和提取方法，不需要添加蛋白酶k，提取的核酸浓度更高。

2、本专利技术实施例提供一种大体积上样量的磁珠法核酸提取试剂盒，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒，其特征是，包括裂解液、洗涤液I、洗涤液II和洗脱液。

2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，裂解液包括如下浓度的组分：异硫氰酸胍4~6M、Tris-HCl 50~100mM、Triton X-100体积浓度5~10%、NP-40体积浓度15~25%、SDS质量浓度0.1~1%、EDTA 20~50mM、DTT 10~50mM、氯化钠 200~500mM、乙酸盐50~100mM，pH为7.5~9.0。

3. 如权利要求2所述的试剂盒，其特征是，裂解液包括如下浓度的组分：异硫氰酸胍5M、Tris-HCl 50mM、Tr...

【技术特征摘要】

1.一种大体积上样量的磁珠法核酸提取用试剂盒，其特征是，包括裂解液、洗涤液i、洗涤液ii和洗脱液。

2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，裂解液包括如下浓度的组分：异硫氰酸胍4~6m、tris-hcl 50~100mm、triton x-100体积浓度5~10%、np-40体积浓度15~25%、sds质量浓度0.1~1%、edta 20~50mm、dtt 10~50mm、氯化钠 200~500mm、乙酸盐50~100mm，ph为7.5~9.0。

3. 如权利要求2所述的试剂盒，其特征是，裂解液包括如下浓度的组分：异硫氰酸胍5m、tris-hcl 50mm、triton x-100体积浓度 5%、np-40体积浓度 15%、sds质量浓度1%、edta20mm、dtt 10mm、氯化钠200mm、乙酸盐50mm，ph为7.5~8.0。

4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，洗涤液i包括如下浓度的组分：异硫氰酸胍4~6m、tris-hcl 10~50mm、氯化钠100~250mm、乙酸钠10~50mm，ph为5.5~7.0。

5. 如权利要求4所述的试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡巧云，文荻琛，喻正军，敖超杰，陈娟，冯静，李尤美，姜凤宁，
申请(专利权)人：湖南省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：