一种高效生物合成γ-聚谷氨酸工程菌的构建方法与应用技术

本发明专利技术属于合成生物学技术领域，具体涉及一种高效生物合成γ‑聚谷氨酸工程菌的构建方法与应用。本发明专利技术通过对γ–聚谷氨酸合成酶的3个蛋白PgsB、PgsC和PgsA进行点突变，人工合成γ–聚谷氨酸合成酶诱导表达的关键基因和启动子，构建γ–聚谷氨酸合成酶基因诱导表达载体pET‑P20‑pgsBCAm，再将诱导表达载体导入到大肠杆菌中，获得工程菌，并利用所述工程菌获得一种生物合成γ–聚谷氨酸的方法。本发明专利技术所述工程菌以葡萄糖为起始生长碳源、谷氨酸为诱导物，在发酵后期诱导γ–聚谷氨酸合成酶高水平表达，从而获得高纯、高产率的γ–聚谷氨酸。与现有聚谷氨酸合成技术相比，聚谷氨酸合成酶突变体的催化活性高，γ–聚谷氨酸经诱导后高水平合成，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于合成生物学，具体涉及一种高效生物合成γ-聚谷氨酸工程菌的构建方法与应用，本专利技术主要涉及一种高效合成γ–聚谷氨酸工程菌的构建，本专利技术通过人工合成γ–聚谷氨酸合成酶诱导表达的关键基因和启动子，构建γ–聚谷氨酸合成酶基因诱导表达载体，再将诱导表达载体导入到菌体，获得工程菌，并利用所述工程菌获得一种生物合成γ–聚谷氨酸的方法。

技术介绍

1、聚谷氨酸是一种由谷氨酸单体通过酰胺键聚合而成的高分子聚合物。由于聚合方式不同，聚谷氨酸主要有2种构型，即：通过α-酰胺键聚合的α-聚谷氨酸和通过γ-酰胺键聚合的γ-聚谷氨酸，分子量在10～10000kda。

2、γ–聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid、γ–pga)，是一种聚谷氨酸合成酶系在体内催化谷氨酸单体、通过γ-氨基酸键连接而成的高分子聚合物，分子式为(c5h8no4)n(结构如图1所示)。γ-聚谷氨酸不仅对人体无毒，而且对生态环境友好，展现出卓越的生物相容性和生物可降解性。在生物体内，它能降解为谷氨酸并被直接吸收，这一特性使其在生物医用材料方面具有潜在应用。同时，它还可作为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效生物合成γ-聚谷氨酸工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，谷氨酸诱导型强启动子P20的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1）中，所述突变型蛋白PgsBm的氨基酸序列和突变位点如SEQ ID No.5所示；

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述突变基因pgsBm的核苷酸序列如SEQID No.2所示；所述突变基因pgsCm的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述突变基因pgsAm的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示...

【技术特征摘要】

1.一种高效生物合成γ-聚谷氨酸工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，谷氨酸诱导型强启动子p20的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1）中，所述突变型蛋白pgsbm的氨基酸序列和突变位点如seq id no.5所示；

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述突变基因pgsbm的核苷酸序列如seqid no.2所示；所述突变基因pgscm的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述突变基因pgsam的核苷酸序列如seq id no.4所示。

5.利用权利要求1~4任一所述方法构建的携...

【专利技术属性】
技术研发人员：林敏，魏金凤，冯海超，王玥，苏律，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：