SCN1A在制备检测神经发育障碍性疾病的试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及神经发育障碍性疾病检测试剂领域，具体涉及SCN1A在制备检测神经发育障碍性疾病的试剂盒中的应用，特别是检测该基因的特定多突变位点的应用。这些突变位点包括chr2:165984651、chr2:165984876和chr2:165984932的单核苷酸缺失突变，与注意力缺陷多动障碍相关。本发明专利技术提供的试剂盒结合靶向切割和荧光PCR扩增技术，提高了对SCN1A基因多突变位点的检测灵敏度。本发明专利技术提供的试剂盒通过覆盖多个SCN1A基因突变位点，增强了检测的全面性，并通过阈值效应识别复合突变个体，提升了检测的灵敏度和特异性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及神经发育障碍性疾病检测试剂领域，具体涉及scn1a在制备检测神经发育障碍性疾病的试剂盒中的应用。

技术介绍

1、神经发育障碍性疾病是一种在胎儿期至青春期阶段，由于神经系统发育异常或受损，导致认知、行为、语言、运动等方面出现持续性功能障碍的疾病。注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder,adhd），又称儿童多动症，是最常见的神经发育障碍之一，主要表现为与年龄和发育水平不相称的注意力不集中和注意时间短暂、活动过度和冲动，常伴有学习困难、品行障碍和适应不良。adhd作为神经发育障碍性疾病，其主要特征是注意力不集中、多动和冲动行为，这些症状通常在儿童时期出现，并可能持续到成年。根据《国际疾病分类》第11版（icd-11）和美国《精神障碍诊断与统计手册》第5版（dsm-5），adhd被明确归类为神经发育障碍性疾病。

2、电压门控钠离子通道α亚基1型(scn1a)基因，位于2号染色体长臂2区4带(2q24.3)，全长约70kb，包含26个外显子，编码nav1.1蛋白，主要在中枢神经系统本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.检测神经发育障碍性疾病的试剂盒，其特征在于，包括CRISPR/Cas9切割体系及荧光PCR扩增体系；其中，所述CRISPR/Cas9切割体系包括如SEQ ID NO.2所示的sgRNA-1、如SEQID NO.3所示的sgRNA-2、如SEQ ID NO.4所示的sgRNA-3及Cas9蛋白；所述荧光PCR扩增体系包括如SEQ ID NO.5~13所示的DNA分子，所述CRISPR/Cas9切割体系对基因组DNA进行靶向切割得到包含SCN1A基因多突变位点的目的序列，所述荧光PCR扩增体系对所述目的序列进行荧光扩增，所述SCN1A基因多突变位点为chr2:165984651、chr2...

【技术特征摘要】

1.检测神经发育障碍性疾病的试剂盒，其特征在于，包括crispr/cas9切割体系及荧光pcr扩增体系；其中，所述crispr/cas9切割体系包括如seq id no.2所示的sgrna-1、如seqid no.3所示的sgrna-2、如seq id no.4所示的sgrna-3及cas9蛋白；所述荧光pcr扩增体系包括如seq id no.5~13所示的dna分子，所述crispr/cas9切割体系对基因组dna进行靶向切割得到包含scn1a基因多突变位点的目的序列，所述荧光pcr扩增体系对所述目的序列进行荧光扩增，所述scn1a基因多突变位点为chr2:165984651、chr2:165984876及chr2:165984932处的单核苷酸缺失突变，所述神经发育障碍性疾病具体为注意力缺陷多动障碍。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述crispr/cas9切割体系具体包括终浓度为50~200nm cas9蛋白、终浓度为50~300nm sgrna-1、终浓度为50~300nm sgrna-2、终浓度为50~300nm sgrna-3、50~200ng基因组dna、10×nebuffer3.1、终浓度为0.05~0.15mg/ml bsa、终浓度为0.1~1u/μl rnaseinhibitor及双蒸水。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述crispr/cas9切割体系具体包括终浓度为100nm cas9蛋白、终浓度为200nm sgrna-1、终浓度为200nm sgrna-2、终浓度为200nm sgrna-3、100ng基因组dna、10×nebuffer3.1、终浓度为0.1mg/ml bsa、终浓度为0.5u/μl rnaseinhibitor及双蒸水。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，如seq id no.5所示dna和如seq idno.6所示dna为引物对，如seq id n...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎萍，贾宇希，赵芷若，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：