【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、基因工程作为改善人类健康的工具具有几乎无限的潜力。事实上，基因工程已经在当今医学实践的各个方面引入并改变了疗法。受到特别关注的是t细胞的基因工程。基于t细胞的疗法已成为强大的新药，尤其是在癌症和免疫系统调控领域。然而，关于改善经基因工程化的t细胞的活力和扩增能力仍然存在重大障碍。
2、本文尤其公开了本领域中这些问题和其他问题的解决方案。
技术实现思路
1、在一个方面，本文提供一种编辑t细胞群体中内源性基因的方法，该方法包括：在允许编码基因编辑试剂的多核苷酸或基因编辑试剂进入细胞的条件下，使该t细胞群体与该基因编辑试剂或该多核苷酸接触；以及在接触步骤之前和/或期间和/或之后，在以下中的一者或多者的存在下培养该t细胞群体以获得工程化t细胞群体：胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂。
2、在另一方面，本文提供一种监测工程化t细胞群体的细胞活力的方法，该方法包括随时间测量线粒体功能和细胞代谢。
3、在另一方面，本文提供一种监测...
【技术保护点】
1.一种编辑T细胞群体中内源性基因的方法，所述方法包括：在允许编码基因编辑试剂的多核苷酸或基因编辑试剂进入细胞的条件下，使所述T细胞群体与所述基因编辑试剂或所述多核苷酸接触，并且在接触步骤之前和/或期间和/或之后，在以下中的一者或多者的存在下培养所述T细胞群体以获得工程化T细胞群体：胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述T细胞群体与供体DNA接触。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中编码所述基因编辑试剂的所述多核苷酸包括：单链DNA、双链DNA、线性DNA链、质粒、纳米质
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种编辑t细胞群体中内源性基因的方法，所述方法包括：在允许编码基因编辑试剂的多核苷酸或基因编辑试剂进入细胞的条件下，使所述t细胞群体与所述基因编辑试剂或所述多核苷酸接触，并且在接触步骤之前和/或期间和/或之后，在以下中的一者或多者的存在下培养所述t细胞群体以获得工程化t细胞群体：胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使所述t细胞群体与供体dna接触。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中编码所述基因编辑试剂的所述多核苷酸包括：单链dna、双链dna、线性dna链、质粒、纳米质粒或微环。
4.根据权利要求3所述的方法，其中编码所述基因编辑试剂的所述多核苷酸包括质粒，所述质粒包含质粒骨架和编码所述基因编辑试剂的多核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述质粒进一步包含所述供体dna。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其中供体dna序列包含编码基因产物的多核苷酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述t细胞群体从受试者获得。
8.根据权利要求7所述的方法，其中基因产物序列包括嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、人类白细胞抗原(hla)或同种免疫防御受体(adr)或其亚基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中tcr序列包括外源性tcr-β亚基或其片段和/或外源性tcr-α亚基或其片段、或嵌合抗原受体和/或其亚基。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述tcr序列包括外源性tcr-β亚基或其片段和外源性tcr-α亚基或其片段。
11.根据权利要求10所述的方法，其中将所述tcr序列插入trac或trbc基因座中。
12.根据权利要求10所述的方法，其中将所述tcr序列插入trac基因座中。
13.根据权利要求10所述的方法，其中将所述tcr序列插入trbc基因座中。
14.根据权利要求1或2所述的方法，其中使所述t细胞群体与所述基因编辑试剂或编码所述基因编辑试剂的多核苷酸接触包括用所述基因编辑试剂或编码所述基因编辑试剂的多核苷酸转染所述t细胞群体。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述转染包括电穿孔。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述转染包括核转染。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述转染包括脂质体转染。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述转染包括微流控转染。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中在所述接触步骤之前，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体。
20.根据权利要求19所述的方法，其包括在所述接触步骤之前，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30分钟。
21.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中在所述接触步骤之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体。
22.根据权利要求21所述的方法，其包括在所述接触步骤之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30分钟。
23.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中在所述接触步骤之前和之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体。
24.根据权利要求23所述的方法，其包括在所述接触步骤之前，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30分钟。
25.根据权利要求23或24所述的方法，其包括在所述接触步骤之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30分钟。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中以约1μg/ml至约50μg/ml的浓度施用所述胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中以约1μg/ml、约5μg/ml或约25μg/ml的浓度施用所述胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中同时用所述供体dna和所述基因编辑试剂或编码所述基因编辑试剂的所述多核苷酸转染所述t细胞群体。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述基因编辑试剂包括rna指导的核酸酶。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述rna指导的核酸酶为crispr-cas系统。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述crispr-cas系统包括cas9或cas9变体。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述基因编辑试剂包括crispr-cas系统，所述crispr-cas系统包含cas蛋白和指导rna。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中至少80％的工程化t细胞为t中央记忆型(tcm)和/或t干细胞记忆型(tscm)。
34.一种监测工程化t细胞群体的细胞活力的方法，所述方法包括随时间测量线粒体功能和细胞代谢。
35.根据权利要求34所述的方法，其中测量线粒体膜电位。
36.根据权利要求35所述的方法，其中使用基于染料的测定法来测量所述线粒体膜电位。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述染料为jc-1或jc-10。
38.一种监测工程化t细胞群体的细胞活力的方法，所述方法包括随时间测量细胞代谢标志物。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述方法包括测量葡萄糖代谢、bcl-2表达、bcl-xl表达、bax表达或bad表达随时间的变化。
40.根据权利要求39所述的方法，其中使用葡萄糖类似物来监测所述工程化t细胞群体葡萄糖代谢。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述类似物为2-nbdg。
42.一种增加工程化t细胞群体的细胞活力的方法，所述方法包括在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂、胰岛素部分激动剂、基因编辑试剂或编码基因编辑试剂的多核苷酸的存在下接触t细胞群体，从而形成所述工程化t细胞群体，其中所述工程化t细胞群体相对于未与胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂或胰岛素部分激动剂接触的工程化t细胞群体具有增加的细胞活力、生长和/或基因编辑效率，其中向有此需要的受试者施用所述工程化t细胞群体。
43.根据权利要求42所述的方法，其进一步包括使所述t细胞群体与供体dna接触。
44.根据权利要求42或43所述的方法，其中所述多核苷酸包括：单链dna、双链dna、线性dna链、质粒、纳米质粒或微环。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述多核苷酸包括质粒，所述质粒包含质粒骨架和编码所述基因编辑试剂的多核苷酸序列。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述质粒进一步包含所述供体dna。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的方法，其中供体dna序列包含编码基因产物的多核苷酸。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述基因产物对于所述受试者是自体的或同种异体的。
49.根据权利要求47所述的方法，其中基因产物序列包括嵌合抗原受体(car)、t细胞受体(tcr)、人类白细胞抗原(hla)或同种免疫防御受体(adr)或其亚基。
50.根据权利要求49所述的方法，其中tcr序列包括外源性tcr-β亚基或其片段和/或外源性tcr-α亚基或其片段、或嵌合抗原受体和/或其亚基。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述tcr序列包括外源性tcr-β亚基或其片段和外源性tcr-α亚基或其片段。
52.根据权利要求51所述的方法，其中将所述tcr序列插入trac或trbc基因座中。
53.根据权利要求51所述的方法，其中将所述tcr序列插入trac基因座中。
54.根据权利要求51所述的方法，其中将所述tcr序列插入trbc基因座中。
55.根据权利要求42或43所述的方法，其中使所述t细胞群体与所述基因编辑试剂或编码所述基因编辑试剂的多核苷酸接触包括用所述基因编辑试剂或编码所述基因编辑试剂的多核苷酸转染所述t细胞群体。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述转染包括电穿孔。
57.根据权利要求55所述的方法，其中所述转染包括核转染。
58.根据权利要求55所述的方法，其中所述转染包括脂质体转染。
59.根据权利要求55所述的方法，其中所述转染包括微流控转染。
60.根据权利要求42至59中任一项所述的方法，其中在接触步骤之前，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体。
61.根据权利要求60所述的方法，其包括在所述接触步骤之前，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30分钟。
62.根据权利要求42至59中任一项所述的方法，其中在接触步骤之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体。
63.根据权利要求62所述的方法，其包括在所述接触步骤之后，在胰岛素、胰岛素类似物、胰岛素激动剂和/或胰岛素部分激动剂的存在下培养所述t细胞群体达48小时、24小时、12小时、6小时、4小时、2小时、1小时或30...
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