一种双表达sFLT-1和shVEGF的AAV2重组基因系统及其制备方法和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种双表达sFLT‑1和shVEGF的AAV2重组基因系统及其制备方法和应用，实现sFLT‑1和shVEGF共表达。目标基因(sFLT‑1:NM_001159920.2，shVEGF:NM_001025366.3)经BamHI、HindIII、EcoRI、MluI位点克隆至pAAV‑CMV载体，构建pAAV‑CMV‑sFLT‑1‑shVEGF质粒，并经PCR、酶切和测序验证。随后，与pAAV‑RC2和pHelper质粒共转染HEK293细胞生产rAAV颗粒，经碘戊糖梯度超速离心纯化，‑80℃保存。它具有如下优点：稳定表达sFLT‑1和shVEGF、低免疫反应性、长期发挥作用等，使得该双表达sFLT‑1和shVEGF的AAV2重组基因系统可以应用于多种新生血管疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种双表达sflt-1和shvegf的aav2重组基因系统及其制备方法和应用。

技术介绍

1、血管生成性眼部疾病是发达国家失明的最常见原因之一，涉及多种疾病的发生和发展，影响着全球数千万患者。这类疾病在眼科中最难治疗，患者的预后也往往最差。视网膜新生血管相关疾病主要包括早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,rop)、糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,pdr)和年龄相关性黄斑变性(age-relatedmacular degeneration,amd)。这些疾病的发生机制主要由缺氧、炎症、氧化应激等因素驱动，这些刺激会导致缺氧诱导因子-1(hif-1α)水平升高，从而促进vegf生成，最终导致病理性新生血管的形成。

2、vegf生长因子家族在视网膜新生血管性疾病的发病进程中扮演着至关重要的角色，它不仅加剧视网膜的炎症反应，还直接促进血管新生及血管渗漏。鉴于其核心地位，当前治疗策略中，通过玻璃体内反复注射抗vegf的重组融合蛋白类药物(如阿柏西普、康柏西普、雷珠单抗等)已成为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.sFLT-1和shVEGF双基因在制备视网膜病变药物中的应用，所述sFLT-1序列如NM_001159920.2所示，所述shVEGF基因如NM_001025366.3所示。

2.一种双表达sFLT-1和shVEGF的AAV2重组基因系统，其特征在于：为AAV2病毒重组载体，所述AAV2病毒重组载体包含sFLT-1基因以及shVEGF基因，所述AAV2病毒重组载体包含的sFLT-1基因，序列如NM_001159920.2所示，shVEGF基因如NM_001025366.3所示。

3.如权利要求2所述的一种双表达sFLT-1和shVEGF的AAV2重组基因系统，...

【技术特征摘要】

1.sflt-1和shvegf双基因在制备视网膜病变药物中的应用，所述sflt-1序列如nm_001159920.2所示，所述shvegf基因如nm_001025366.3所示。

2.一种双表达sflt-1和shvegf的aav2重组基因系统，其特征在于：为aav2病毒重组载体，所述aav2病毒重组载体包含sflt-1基因以及shvegf基因，所述aav2病毒重组载体包含的sflt-1基因，序列如nm_001159920.2所示，shvegf基因如nm_001025366.3所示。

3.如权利要求2所述的一种双表达sflt-1和shvegf的aav2重组基因系统，其特征在于：所述重组载体为sflt-1基因以及shvegf基因片段,与去磷酸化的paav-cmv载体进行连接构建而成。

4.根据权利要求2或3任一项所述的一种双表达sflt-1和shvegf的aav2重组基因系统的制备方法，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的一种双表达sflt-1和shvegf的aav2重组基因系统的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李程，陈翠婷，董诺，
申请(专利权)人：翔安创新实验室，
类型：发明
国别省市：