APB小RNA印迹杂交区分四种末端小RNA的方法技术

本发明专利技术属于RNA修饰检测技术领域，具体为APB小RNA印迹杂交区分四种末端小RNA的方法。本发明专利技术将待测RNA经过磷酸酶、T4多聚核苷酸激酶处理，RNA纯化，APB小RNA印迹杂交，通过比较处理前后电泳迁移速率是否变化，获悉其对磷酸酶、T4多聚核苷酸激酶的响应情况，进而推断其在处理前的末端类型：2',3'OH,2'OMe,2',3'cP,3'P。与传统小RNA印迹杂交方法相比，不同修饰小RNA在APB凝胶电泳时条带的迁移速率差异更大，解决了传统方法中不同修饰RNA迁移速率差异小，受RNA纯度、浓度以及实验条件影响导致实验结果经常难以判定的难题，在小RNA修饰及其功能研究领域具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于rna修饰检测，具体涉及向尿素变性胶中添加apb以准确区分2',3'oh,2'ome,2',3'cp,3'p四种末端小rna的方法。

技术介绍

1、基因表达调控是生物学研究领域中基础的科学问题之一，小分子rna介导的基因沉默是基因表达调控的重要机制，根据来源、产生方式及作用方式，小分子rna主要分为mirna、sirna、pirna三大类。除上述三类经典的小rna外，来源于trna、rrna、snrna等结构性rna以及来源于编码和长非编码rna的小rna也逐渐成为领域内的研究热点。

2、小rna的末端修饰对其稳定性的维持及功能发挥至关重要，其主要类型有以下四种：2',3'oh(即未修饰),2'ome(2’-o-methylation，2位氧甲基化修饰),2',3'cp(2',3'cyclic phosphate，2位及3位环磷酸修饰),3'p(3’phosphate，3位磷酸修饰)。其中2'ome修饰在维持植物mirna、动物pirna以及果蝇ago2结合的sirna的稳定性上发挥重要作用，2',3'cp/3'p是绝大部分5’t本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种APB小RNA印迹杂交区分四种末端小RNA的方法，小RNA四种末端类型为2',3'OH,2'OMe,2',3'cP,3'P，其特征在于，包括待检测RNA的获取，磷酸酶、T4多聚核苷酸激酶处理，RNA纯化，APB小RNA印迹杂交；其中：

2.根据权利要求1所述的区分四种末端小RNA的方法，其特征在于，所区分的小RNA的长度范围为10-50nt。

3.根据权利要求1所述的区分四种末端小RNA的方法，其特征在于，所述磷酸酶、T4多聚核苷酸激酶消化RNA的具体操作过程中，所使用的磷酸酶为虾碱性磷酸酶或小牛肠碱性磷酸酶，使用T4多聚核苷酸激酶或HCl+磷酸酶。...

【技术特征摘要】

1.一种apb小rna印迹杂交区分四种末端小rna的方法，小rna四种末端类型为2',3'oh,2'ome,2',3'cp,3'p，其特征在于，包括待检测rna的获取，磷酸酶、t4多聚核苷酸激酶处理，rna纯化，apb小rna印迹杂交；其中：

2.根据权利要求1所述的区分四种末端小rna的方法，其特征在于，所区分的小rna的长度范围为10-50nt。

3.根据权利要求1所述的区分四种末端小rna的方法，其特征在于，所述磷酸酶、t4多聚核苷酸激酶消化rna的具体操作过程中，所使用的磷酸酶为虾碱性磷酸酶或小牛肠碱性磷酸酶，使用t4多聚核苷酸激酶或h...

【专利技术属性】
技术研发人员：任国栋，陈素素，张彬，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：