【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及使用双亲和多肽的通用亲和纯化技术。特别地,本专利技术涉及在溶液中用于从靶分子中除去双亲和蛋白质的快速且有效的方法。
技术介绍
1、目前最常见的生物分子诸如蛋白质的亲和纯化方法是亲和柱层析,其中靶生物分子与固定化在柱树脂或固体基质上的亲和配体结合,进行清洗并随后通过洗脱从柱树脂回收。
2、亲和固体支持物、树脂珠粒、基质或固相用特定靶物结合性分子或配体进行功能化,并且通常填充在柱中。
3、亲和纯化中使用的树脂珠粒是使用化学交联反应由聚合物制备的。通常,这些珠粒具有约90-100μm的尺寸并含有多个约30nm的孔。珠粒的外表面和内表面两者都可用于附接亲和配体。
4、这些珠粒的外表面积为内表面积的约1/100。这意味着只有一小部分珠粒表面可用于在外部的配体附接,而大部分配体被固定在树脂珠粒内。
5、因此,产物分子只能通过经历基于扩散的质量传递到达珠粒的内表面来与附接的亲和配体相互作用。这种扩散过程需要时间,并且无论是在实验室规模、中试规模还是工业规模,在所有树脂层析过程间具有一致的特
...【技术保护点】
1.用于纯化靶生物分子的方法,其包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述双亲和多肽的平衡解离常数之间的比率[KD,t/KD,s]在标准条件下为至少101。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中步骤b.中的所述清洗是通过过滤,诸如经由深度过滤来进行。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中步骤c.中的所述pH在2.8-4.7的范围内,优选地在3.1-4.5的pH范围内,更优选地在约3.4-4.3的pH范围内。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述可溶性基质是水溶性基质或可溶于水溶液。
6.根...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.用于纯化靶生物分子的方法,其包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述双亲和多肽的平衡解离常数之间的比率[kd,t/kd,s]在标准条件下为至少101。
3.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中步骤b.中的所述清洗是通过过滤,诸如经由深度过滤来进行。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中步骤c.中的所述ph在2.8-4.7的范围内,优选地在3.1-4.5的ph范围内,更优选地在约3.4-4.3的ph范围内。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述可溶性基质是水溶性基质或可溶于水溶液。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述可溶性基质是选自下组的聚合物:葡聚糖、黄原胶、果胶、甲壳素和壳聚糖、卡拉胶、瓜尔胶、纤维素醚、透明质酸、白蛋白、羟乙基淀粉及其他淀粉衍生物、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、二乙烯基醚-马来酸酐、聚噁唑啉、聚磷酸盐、聚磷腈、其共聚物及其混合物,优选地选自下组:葡聚糖、卡拉胶、果胶、纤维素醚、聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、其共聚物及其混合物,更优选地,所述可溶性基质是葡聚糖聚合物。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述可溶性基质与所述靶生物分子之间的尺寸差异为至少3倍,诸如至少5倍、诸如至少7倍、诸如至少10倍的尺寸差异。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述dap-可溶性基质与所述靶生物分子之间的尺寸差异为至少3倍,诸如至少5倍、诸如至少7倍、诸如至少10倍的尺寸差异。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述可溶性基质经由接头与所述捕获配体连接,所述接头具有...
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