一种基于链置换驱动RCA-Cas12a构建AND逻辑门超灵敏检测乳腺癌miRNAs的方法技术

本发明专利技术属于生物分析技术领域，具体涉及链置换反应、滚环扩增、CRISPR‑Cas12a系统、体外转录在miRNAs检测中的应用。本发明专利技术提供了通过链置换反应驱动NRCA和LRCA扩增，实现激活剂的高效扩增，结合转录的crRNA激活Cas12a的反式切割，实现荧光信号放大，灵敏地特异性检测乳腺癌miR‑21和miR‑155的方法。该方法以便捷、灵敏、低背景干扰和特异性强，可应用于乳腺癌血清中miR‑21和miR‑155的同时检测，能有效区分健康个体与乳腺癌患者，拓展了CRISPR‑Cas12a在体外诊断领域的方法学，展现出广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物分析，具体涉及一种基于链置换驱动rca-cas12a构建and逻辑门超灵敏检测乳腺癌mirnas(mir-21和mir-155)的方法。

技术介绍

1、乳腺癌作为全球女性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，其高转移特性显著增加临床预后风险。值得注意的是，约90％的乳腺癌相关死亡并非源于病灶，而是由转移性病灶复发引发的继发病症所致。由于这些继发肿瘤多在晚期才被检出，导致临床诊疗面临更大挑战。因此，急需通过发现生物标志物来构建针对转移性乳腺癌的新型早期诊断体系，从而改善患者的早期诊断与预后。

2、在肿瘤学领域，特异性的生物标志物对于精确的医学诊断和治疗至关重要。最近的研究提供了证据，表明micrornas(mirnas)在癌细胞与其宿主之间复杂的对话中作为关键的介质。然而，在mirna检测过程中，rna的不稳定性(如污染和降解)是主要挑战之一。为了应对这一问题，迫切需要开发即时检测技术(poct)以及在检测前对rna进行预处理。当前，实时定量聚合酶链反应(rt-qpcr)和northern印迹是mirna检测的常规方法，虽然它们在灵敏度本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于链置换驱动RCA-Cas12a的AND逻辑门平台用于检测miR-21和miR-155的方法，其特征在于，该平台包括发夹探针Hairpin-1和Hairpin-2、挂锁探针Padlock-1和Padlock-2、T4 DNA连接酶、phi29 DNA聚合酶、切刻内切酶Nt.BstNBI、crRNA模板、LbaCas12a和FQ Reporter；其中，所述发夹探针特异性识别miR-21和miR-155，序列如SEQ IDNO：1及SEQ ID NO：2所示；所述挂锁探针Padlock-1和Padlock-2在T4 DNA连接酶作用下被环化，形成NRCA和LRCA的环形模板，序列...

【技术特征摘要】

1.一种基于链置换驱动rca-cas12a的and逻辑门平台用于检测mir-21和mir-155的方法，其特征在于，该平台包括发夹探针hairpin-1和hairpin-2、挂锁探针padlock-1和padlock-2、t4 dna连接酶、phi29 dna聚合酶、切刻内切酶nt.bstnbi、crrna模板、lbacas12a和fq reporter；其中，所述发夹探针特异性识别mir-21和mir-155，序列如seq idno：1及seq id no：2所示；所述挂锁探针padlock-1和padlock-2在t4 dna连接酶作用下被环化，形成nrca和lrca的环形模板，序列如seq id no：3及seq id no：4；所述crrna模板，序列如seq id no：5。

2.根据权利要求1所述的逻辑门平台，其特征在于，所述nrca扩增产物含有切刻内切酶nt.bstnbi切割位点5’-gagtcnnnn▼n-3’(n是任何碱基)。

3.根据权利要求1所述的逻辑门平台，其特征在于，所述fq reporte...

【专利技术属性】
技术研发人员：应站明，潘明茜，李翔，
申请(专利权)人：湘潭大学，
类型：发明
国别省市：